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供貨周期	一周	規(guī)格	50T
貨號	XY-0148	應(yīng)用領(lǐng)域	醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè)
主要用途	熒光定量PCR具有更高的擴(kuò)增效率、更高的擴(kuò)增靈敏度、更高的擴(kuò)增特異性。

牛副流感病毒3型RT-PCR試劑盒

Bovine Parainfluenza Virus 3(BPIV-3)

產(chǎn)品及特點(diǎn)

牛副流感病毒 3 型（BPIV3）是引起牛呼吸系統(tǒng)疾病的主要病原，廣泛分布于世界養(yǎng)牛業(yè)發(fā)達(dá)地區(qū)，BPIV3 常與其他病毒或細(xì)菌混和感染或繼發(fā)感染，對養(yǎng) 牛業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。本產(chǎn)品根據(jù) PCR 原理開發(fā)，可用于科研領(lǐng)域快速檢測牛副流感病毒 3 型。它具有下列特點(diǎn)：

1. 一站式，用于不需要單獨(dú)準(zhǔn)備每種成分，包括引物和對照。

2. 根據(jù)牛副流感病毒 3 型的保守基因序列設(shè)計(jì)的引物，具有良好的特異性。

3. 靈敏度可以達(dá)到 1000 拷貝/反應(yīng)。

4. 使用一管式 RT-PCR 技術(shù)，RT 和 PCR 兩步在一個(gè)試管內(nèi)完成，不需要中間轉(zhuǎn)移樣品，降低了操作誤差和可能的污染。

5. 本產(chǎn)品足夠 50 次 20μL 體系的 RT-PCR。

6. 本產(chǎn)品只能用于科研，不能用于臨床。

牛副流感病毒3型RT-PCR試劑盒規(guī)格及成分

編號	成份	規(guī)格
試劑一	5×雙酶一管式 RT-PCR Buffer	200 μL（橙色蓋）
試劑二	MMLV-Taq Mix	75 μL（紅蓋）
試劑三	超純水	1 mL（藍(lán)色蓋）
試劑四	牛副流感病毒 3 型RT-PCR 引物混合	100 μL（白蓋）
試劑五	牛副流感病毒 3 型 RT-PCR 陽性對照（1×10E8 拷貝/μL）	50 μL（黃蓋）
試劑六	天凈沙核酸釋放劑（試用裝）	20 次（1mL，綠蓋）
試劑七	使用手冊	1 份

運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限為 12 個(gè)月。收到貨后陽性對照需要跟其他成分分開放置，因?yàn)槠淙菀孜廴酒渌煞?，造成假陽性?nbsp;

自備試劑 樣品RNA

使用方法 一、樣品 RNA 的制備

1. 如果有 N 個(gè)樣品，必須設(shè)置 N+2 個(gè)提取，多出的一個(gè)是 PC（樣品制備陽性對照），一個(gè)是 NC（樣品制備陰性對照）?？梢杂?10μL 藍(lán)舌病病毒 PCR 陽性對照的 10000 倍稀釋的（稀釋后濃度為 1×10E4 拷貝/μL，10μL 相當(dāng)于 1 萬拷貝，可以將 10μL 原液加入到 990μL 自備 TE 溶液中，充分混勻，此為 100 倍稀釋液。再取 10μL 此稀釋液加入到 990μL 自備 TE 溶液中，充分混勻，此為 10000 倍稀釋液）再加上一定量的水作為制備的陽性對照（加水后其總體積跟樣品一樣，樣品體積多少取決于所用試劑盒的要求）?？梢杂盟?作為制備的陰性對照。制備所得成為樣品 RNA。

2. 用自選方法純化 N+2 個(gè)樣品的 RNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒 RNA 提取試劑盒兼容。

二、設(shè)置 RT-PCR 反應(yīng)（20μL 體系）

3. 如果有 N+2 個(gè)樣品，則標(biāo)記 N+4 個(gè) PCR 管（額外增加的兩個(gè)管一個(gè)是 RT-PCR 陽性對照，另一個(gè)是 RT-PCR 陰性對照）并按照下表在 PCR 管中加入下列成分：

成分	N+2 個(gè) 樣品管	RT-PCR陰性對照	RT-PCR陽性對照
5×雙酶一管式 RT-PCR Buffer	各 4 μL	4 μL	4 μL
牛副流感病毒 3 型 RT-PCR 引物混合液	各2μL	2μL	各2μL
N+2 個(gè)制備的 RNA 樣品	各12.5 μL
超純水		12.5 μL
牛副流感病毒 3 型 RT-PCR 陽性對照的 10000 倍稀釋液			12.5 μL
MMLV-Taq Mix	1.5 μL	1.5 μL	1.5 μL

4. 上機(jī)進(jìn)行 RT-PCR，RT-PCR 反應(yīng)參數(shù)為:

過程	溫度	時(shí)間
逆轉(zhuǎn)錄	42℃	30 min
預(yù)變性	95℃	5 min
RT - PCR反應(yīng) （30個(gè)循環(huán)）	95℃	30 sec
	53℃	30 sec
	72℃	20 sec
延伸	72℃	7 min

5. 瓊脂糖電泳檢測擴(kuò)增效果，陽性樣品預(yù)期得到的擴(kuò)增產(chǎn)物長度為 273bp。如果陰性對照有此擴(kuò)增產(chǎn)物或陽性對照無此擴(kuò)增產(chǎn)物，則說明實(shí)驗(yàn)失敗，需要分析實(shí)驗(yàn)失敗的原因。只有在陰性對照沒有此擴(kuò)增產(chǎn)物、陽性對照有此擴(kuò)增產(chǎn)物的情況下，才有必要分析樣品的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，如果有此擴(kuò)增產(chǎn)物則為陽性，如果無則為陰性。