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犬細(xì)小病毒染料法熒光定量PCR試劑盒返回列表頁

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參考價(jià): ￥ 2490 ￥ 2290

訂貨量: 1-4 件 ≥5 件

具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)

產(chǎn)品型號50次

品牌其他品牌

廠商性質(zhì)生產(chǎn)商

所在地上海

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更新時(shí)間：2020-07-28 16:03:12瀏覽次數(shù)：425次

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產(chǎn)品分類品牌分類

PCR試劑盒: PCR-染料法 PCR-探針法

全部產(chǎn)品列表

產(chǎn)品簡介

供貨周期	一周	規(guī)格	50T
貨號	XY-0183	應(yīng)用領(lǐng)域	醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè)
主要用途	熒光定量PCR具有更高的擴(kuò)增效率、更高的擴(kuò)增靈敏度、更高的擴(kuò)增特異性。

犬細(xì)小病毒染料法熒光定量PCR試劑盒是群中等小的雙股 DNA 病毒，根據(jù)其理化性質(zhì)分 α、β、γ、未分類皰疹病毒四個(gè)亞科。皰疹病毒感染的宿主范圍廣泛，可感染人類和其他脊椎動(dòng)物。在自然界廣泛存在，主要侵犯外胚層發(fā)育而成的組織，例如：皮膚、粘膜和神經(jīng)組織。

詳情介紹

犬細(xì)小病毒染料法熒光定量PCR試劑盒

Canine Parvo Virus(CPV)

產(chǎn)品及特點(diǎn)

犬犬細(xì)小病毒(Canine Parvovirus，CPV)在分類上屬細(xì)小病毒屬細(xì)小病毒科，是一種單鏈 DNA 病毒。CPV 是感染犬、貓、狼、狐等動(dòng)物并引起細(xì)小病毒病，感染率高達(dá) 100%，致死率 10-50%。PCR 是目前檢測 CPV 的方法，本產(chǎn)品就是定性 PCR 產(chǎn)品（產(chǎn)品編號 11-150）基礎(chǔ)上升級的定量 PCR 檢測試劑盒，專門用于定量鑒定檢測 CPV。本試劑盒具有下列特點(diǎn)：

1. 根據(jù) CPV 衣殼蛋白基因 VP2 設(shè)計(jì)的針對 CPV 的 PCR 引物，專一性強(qiáng)。

2. 即開即用，用戶只需要提供樣品模板，操作簡單，定量準(zhǔn)確快速。

3. 一管式熒光定量 PCR 檢測，避免后續(xù)污染。

4. 本試劑盒足夠 100 次 20uL 反應(yīng)體系的熒光定量 PCR。

5. 本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

犬細(xì)小病毒染料法熒光定量PCR試劑盒規(guī)格及成分

編號	成分	規(guī)格
試劑一	2×qPCR MagicMix	1 mL×2（裝 A 袋）
試劑二	超純水	1 mL×2（裝 A 袋）
試劑三	引物 14-15000F	1 OD（裝 B 袋）
試劑四	引物 14-15000R	1 OD（裝 B 袋）
試劑五	犬細(xì)小病毒 VP2 基因陽性對照 (10E8copy/μL)	50 μL（裝 C 袋）
試劑六	使用手冊	1 份

運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸、-20℃保存(A 袋和 B 袋的試劑放樣品準(zhǔn)備區(qū)、C 袋的陽性對照跟 A 袋和 B 袋的成分分開放置)，有效期一年。

自備試劑 DNA 模板、10×ROX（根據(jù)機(jī)型決定，具體見使用方法）。

使用方法 一、樣品 DNA 的制備

1. 用自選方法純化樣品的 DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒 DNA 提取試劑盒兼容，也可以選購本公司的柱式病毒 DNAout。

二、引物的制備（在樣品制備室進(jìn)行）

2. 按引物標(biāo)簽提示在裝引物干粉的管中直接加入適量的超純水（加入量見引物試管上的標(biāo)簽），使得兩條引物的濃度均為 10 μM（10pmol/μL），然后各取 110 μL 混合在一起，標(biāo)注為引物混合物，放冰上待用。此引物混合物足夠 100 次 PCR。

三、稀釋陽性對照（以 10E2-10E7 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例。由于陽性對照濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的長為 180bp 的 DNA 段作為陽性對照。

3. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。

4. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水（用帶芯槍頭，下同）。

5. 在 7 號管中加入 5 μL 本試劑盒提供的 10E8 拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩 1 分鐘，得 10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。

6. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。

7. 換槍頭，從 6 號管中取 5 μL 溶液到 5 號管中，充分震蕩 1 分鐘，得 10E5 拷貝/ μL 的陽性對照。放冰上待用。

8. 換槍頭，從 5 號管中取 5 μL 溶液到 4 號管中，得 10E4 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的陽性對照。放冰上待用。

三、設(shè)置 PCR 反應(yīng)（20 μL 體系，在樣品制備室進(jìn)行）

9. 在 PCR 管中加入下列成分（待測樣品需要做三次重復(fù)，下表只列出一次。樣品管和陰性對照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽性對照，并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲(chǔ)存好后后加）：

成分	樣品	陰性對照	陽性對照（2-7 管）
2×qPCR MagicMix （	10 μL	10 μL	各 10 μL
引物混合物	2 μL	2 μL	各 2 μL
自備 10×ROX (見注)	2 μL	2 μL	各 2 μL
待測樣品 DNA 模板	1-5 μL
陽性對照（2-7 號）			各 5μL（2 號樣到 2 號管，3 號樣到 3 號管…）
補(bǔ)水到	20 μL	20 μL	20 μL

10. 蓋上蓋子后上機(jī)，按下面參數(shù)進(jìn)行 PCR（可以根據(jù)儀器不同而自行優(yōu)化）。

過程	溫度	時(shí)間
預(yù)變性	94℃	2 分鐘
PCR 反應(yīng) （40 個(gè)循環(huán)）	94℃	15 秒
PCR 反應(yīng) （40 個(gè)循環(huán)）	60℃	30 秒

11. 數(shù)據(jù)采集在每個(gè)循環(huán)的第二步進(jìn)行熒光信號的采集，具體操作按所用儀器推薦的流程進(jìn)行。本產(chǎn)品中所含的熒光染料在不結(jié)合 DNA 時(shí)，大吸收光譜在 471 nm，結(jié)合 DNA 時(shí)的大吸收光譜在 500 nm，大發(fā)射光譜在 530 nm。

四、數(shù)據(jù)處理

12. 以陽性對照濃度的 log 值為橫軸，以 Ct 值為縱軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測樣品濃度的 log 和標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣品 DNA 的濃度。