斑點叉尾鮰病毒PCR試劑盒

Channel Catfish Virus(CCV)

產(chǎn)品及特點

斑點叉尾鮰病毒(Channel Catfish Virus，CCV) 是鮰皰疹病毒Ⅰ型， 屬皰疹病毒科，呈二十面體，有囊膜，直徑 175～200nm，病毒核酸為雙鏈 DNA。該病毒引起斑點叉尾鮰病毒病，主要感染斑點叉尾鮰的魚苗和魚種，成 魚也可發(fā)生隱性感染稱為帶毒者。目前已成為危害世界各國鮰養(yǎng)殖的主要傳 染病之一。我國近年已在斑點叉尾鮰魚苗中分離到 CCV。由于該病毒主要感染 斑點叉尾鮰和其他鮰的魚苗和幼魚，有很高死亡率，剛孵化魚苗死亡率可達 100%，因此快速靈敏檢測斑點叉尾鮰病毒具有重要意義。本產(chǎn)品就是為此目 的根據(jù) PCR 原理開發(fā)的試劑盒，它具有下列特點： 

1. 即開即用，用戶只需要提供 DNA 模板。

2. 引物經(jīng)過精心優(yōu)化，專一性強，只擴增斑點叉尾鮰病毒，與其他病原沒有交叉 反應。

3. 提供陽性對照，便于區(qū)分假陰性樣品。

4. PCR mix 中含上樣染料，PCR 后可以直接上樣電泳。

5. 本試劑盒足夠做 40μL 體系的 PCR 50 次，但只能用于科研。

斑點叉尾鮰病毒PCR試劑盒規(guī)格及成分

運輸及保存 低溫運輸，-20℃保存，保存期限為一年。陽性對照需要單獨放置，不要污染其 他試劑。  

自備試劑 樣品 DNA。

使用方法 一、樣品 DNA 的制備

1. 用自選方法純化 N+2 個樣品的 DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)核酸提取 試劑盒兼容。

2. 如果有 N 個樣品，則需要做 N+2 個提取，包括一個樣品制備陽性對照和一 個樣品制備陰性對照。樣品制備陽性對照是在適量水（取決于試劑盒要求 的樣品起始量）中加 10μL 芽孢桿菌通用 PCR 陽性對照的 10000 倍稀釋 液而得，樣品制備陰性對照是直接用水。提取結(jié)束后后得到模板 DNA 放 冰上待用。 

二、設(shè)置 PCR 反應（40μL 體系）

3. 對 N+2 個樣品，在 PCR 時需要增加一個 PCR 陽性對照和一個 PCR 陰性 對照，故需要設(shè)置 N+4 個反應。在 N+4 個 PCR 管中分別加入下列成分： 

4. 按下表設(shè)置 PCR 反應：

三、電泳檢測

5. 取 10-20 μL PCR 產(chǎn)物。電泳檢測 PCR 產(chǎn)物。本產(chǎn)品提供的 PCR Mix 在 擴增結(jié)束后可以直接上樣，不需要另外再加 loading buffer。PCR 產(chǎn)物陽 性對照必須有 551bp 大小的條帶出現(xiàn)，陰性對照必須無任何擴增，否則實 驗無效。對沒有擴增產(chǎn)物的樣品，可以稀釋 10 倍后重復 PCR 擴增以排除 PCR 抑制劑的感染。