牛傳染性胸膜肺炎PCR試劑盒

Contagious Bovine Pleuropneumonia (CBPP)

產(chǎn)品及特點

牛傳染性胸膜肺炎（又稱牛肺疫）是由絲狀支原體絲狀亞種引起的一種高 度接觸性傳染病，以滲出性纖維素性肺炎和漿液纖維素性胸膜肺炎為特征。本 病易感動物主要是牦牛、奶牛、黃牛、水牛、犏牛、馴鹿及羚羊。各種牛對本 病的易感性，依其品種、生活方式及個體抵抗力不同而有區(qū)別，發(fā)病率為 60%-70%，病死率約 30%-50%，山羊、綿羊及駱駝在自然情況下不易感染， 其他動物及人無易感性。主要傳染源是病牛及帶菌牛。據(jù)報道，病?？祻?15 個月甚至 2-3 年后還能感染健牛。本產(chǎn)品是根據(jù) PCR 原理開發(fā)檢測牛傳染性 胸膜肺炎的試劑盒，它具有下列特點：

1. 即開即用，用戶只需要提供 DNA 模板。

2. 引物經(jīng)過精心優(yōu)化，專一性強，只擴增牛傳染性胸膜肺炎，但跟其他微生 物無交叉反應(yīng)。 

3. 提供陽性對照，便于區(qū)分假陰性樣品。

4. PCR mix 中含上樣染料，PCR 后可以直接上樣電泳。

5. 本試劑盒足夠做 40μL 體系的 PCR 50 次，但只能用于科研。

牛傳染性胸膜肺炎PCR試劑盒規(guī)格及成分

運輸及保存 低溫運輸，-20℃保存，保存期限為一年。陽性對照需要單獨放置，不要污染其 他試劑。  

自備試劑 樣品 DNA。

使用方法 一、樣品 DNA 的制備

1. 用自選方法純化 N+2 個樣品的 DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)核酸提取 試劑盒兼容。

2. 如果有 N 個樣品，則需要做 N+2 個提取，包括一個樣品制備陽性對照和一 個樣品制備陰性對照。樣品制備陽性對照是在適量水（取決于試劑盒要求 的樣品起始量）中加 10μL 芽孢桿菌通用 PCR 陽性對照的 10000 倍稀釋 液而得，樣品制備陰性對照是直接用水。提取結(jié)束后后得到模板 DNA 放 冰上待用。 

二、設(shè)置 PCR 反應(yīng)（40μL 體系）

3. 對 N+2 個樣品，在 PCR 時需要增加一個 PCR 陽性對照和一個 PCR 陰性 對照，故需要設(shè)置 N+4 個反應(yīng)。在 N+4 個 PCR 管中分別加入下列成分： 

4. 按下表設(shè)置 PCR 反應(yīng)：

三、電泳檢測

5. 取 10-20 μL PCR 產(chǎn)物。電泳檢測 PCR 產(chǎn)物。本產(chǎn)品提供的 PCR Mix 在 擴增結(jié)束后可以直接上樣，不需要另外再加 loading buffer。PCR 產(chǎn)物陽 性對照必須有 551bp 大小的條帶出現(xiàn)，陰性對照必須無任何擴增，否則實 驗無效。對沒有擴增產(chǎn)物的樣品，可以稀釋 10 倍后重復 PCR 擴增以排除 PCR 抑制劑的感染。