腦心肌炎病毒RT-PCR試劑盒

Encephalomyocarditis Virus(EMCV)

產(chǎn)品及特點

腦心肌炎病毒（Encephalomyocarditis Virus，EMCV）在分類上屬小 RNA 病毒科，心肌病毒屬，是一種無囊膜的單股正鏈 RNA 病毒。由 EMCV 引 起 的豬腦心肌炎是豬的一種以腦炎、心肌炎或心肌周圍炎為主要特征的急性傳染 病，給養(yǎng)豬業(yè)造成了大的經(jīng)濟損失。本產(chǎn)品適用于檢測豬血清、腦、心肌以及 淋巴結(jié)等組織標本或病毒培養(yǎng)液中 EMCV 的 mRNA，適用于 EMCV 感染的 輔助診斷。它具有下列特點： 

1. 一站式，用于不需要單獨準備每種成分，包括引物和對照。

2. 根據(jù) EMCV 的保守基因序列設計的引物，具有良好的特異性。

3. 靈敏度可以達到 1000 拷貝/反應。

4. 使用一管式 RT-PCR 技術(shù)，RT 和 PCR 兩步在一個試管內(nèi)完成，不需要中間 轉(zhuǎn)移樣品，降低了操作誤差和可能的污染。

5. 本產(chǎn)品足夠 50 次 30uL 體系的 RT-PCR。

6. 本產(chǎn)品只能用于科研，不能用于臨床。

腦心肌炎病毒RT-PCR試劑盒規(guī)格及成分

運輸及保存 低溫運輸，-20℃保存，保存期限為 12 個月。收到貨后陽性對照需要跟其他成分 分開放置，因為其容易污染其他成分，造成假陽性。  

自備試劑 樣品 RNA

使用方法 一、樣品 RNA 的制備

1. 如果有 N 個樣品，必須設置 N+2 個提取，多出的一個是 PC（樣品制備陽性 對照），一個是 NC（樣品制備陰性對照）?？梢杂?11.5μL EMCV PCR 陽性 對照的 10000 倍稀釋的（稀釋后濃度為 1×10E4 拷貝/μL，10μL 相當于 1 萬拷貝，可以將 10uL 原液加入到 990uL 自備 TE 溶液中，充分混勻，此為 100 倍稀釋液。再取 10uL 此稀釋液加入到 990uL 自備 TE 溶液中，充分混 勻，此為 10000 倍稀釋液）再加上一定量的水作為制備的陽性對照（加水后 其總體積跟樣品一樣，樣品體積多少取決于所用試劑盒的要求）?？梢杂盟?為制備的陰性對照。制備所得成為樣品 RNA。

2. 用自選方法純化 N+2 個樣品的 RNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒 RNA 提 取試劑盒兼容。 

二、設置 RT-PCR 反應（30uL 體系） 3. 如果有 N+2 個樣品，則標記 N+4 個 PCR 管（額外增加的兩個管一個是 RT-PCR 陽性對照，另一個是 RT-PCR 陰性對照）并按照下表在 PCR 管中 加入下列成分：

4. 上機進行 RT-PCR，RT-PCR 反應參數(shù)為: 

5. 瓊脂糖電泳檢測擴增效果，陽性樣品預期得到的擴增產(chǎn)物長度為 286bp。如 果陰性對照有此擴增產(chǎn)物或陽性對照無此擴增產(chǎn)物，則說明實驗失敗，需要 分析實驗失敗的原因。只有在陰性對照沒有此擴增產(chǎn)物、陽性對照有此擴增 產(chǎn)物的情況下，才有必要分析樣品的實驗結(jié)果，如果有此擴增產(chǎn)物則為陽性， 如果無則為陰性