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上海信裕生物科技有限公司
中級(jí)會(huì)員 | 第11年

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當(dāng)前位置:上海信裕生物科技有限公司>>PCR試劑盒>>PCR-染料法>> 50次幽門螺旋桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒

幽門螺旋桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒

參   考   價(jià): 3490 3290

訂  貨  量: 1-4  件 ≥5  件

具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)

產(chǎn)品型號(hào)50次

品       牌其他品牌

廠商性質(zhì)生產(chǎn)商

所  在  地上海

更新時(shí)間:2020-08-03 10:51:04瀏覽次數(shù):365次

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供貨周期 一周 規(guī)格 50T
貨號(hào) XY-0341 應(yīng)用領(lǐng)域 醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè)
主要用途 熒光定量PCR具有更高的擴(kuò)增效率、更高的擴(kuò)增靈敏度、更高的擴(kuò)增特異性。
幽門螺旋桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒是群中等小的雙股 DNA 病毒,根據(jù)其理化性質(zhì)分 α、β、γ、未分類皰疹病毒四個(gè)亞科。皰疹病毒感染的宿主范圍廣泛,可感染人類和其他脊椎動(dòng)物。在自然界廣泛存在,主要侵犯外胚層發(fā)育而成的組織,例如:皮膚、粘膜和神經(jīng)組織。

幽門螺旋桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒

Helicobacter pylori

產(chǎn)品及特點(diǎn)

幽門螺旋桿菌(Helicobacter pylori)是一種螺旋形、微厭氧、對生長條件要求十分苛刻的細(xì)菌,也是目前所知能夠在人胃中生存的微生物種類,該細(xì)菌會(huì)引起幽門螺桿菌病,包括由幽門螺桿菌感染引起的胃炎、消化道潰瘍、淋巴增生性胃淋巴瘤等。慢性胃炎和消化道潰瘍患者的普遍癥狀為:食后上腹部飽脹、不適或疼痛,常伴有其他不良癥狀,如噯氣、腹脹、反酸和食欲減退等。有些患者還可出現(xiàn)反復(fù)發(fā)作性劇烈腹痛、上消化道少量出血等。據(jù)此,專家們認(rèn)為,及早發(fā)現(xiàn)幽門螺桿菌感染者,及時(shí)而有效地用抗菌素殺滅幽門螺桿菌,對預(yù)防和控制胃癌有重大意義,因此快速檢測幽門螺旋桿菌具有重要意義。熒光定量PCR是檢測傳染性疾病的主流技術(shù),本產(chǎn)品就是以染料熒光定量PCR技術(shù)為基礎(chǔ)開發(fā)的專門檢測幽門螺旋桿菌的試劑盒,它具有下列特點(diǎn):

1. 即開即用,用戶只需要提供樣品 DNA 模板。

2. 引物和探針經(jīng)過優(yōu)化,靈敏性高。

3. 提供陽性對照,便于區(qū)分假陰性樣品。

4.特異性高,引物是根據(jù)人幽門螺旋桿菌高度保守的VP1區(qū)設(shè)計(jì),不會(huì)跟其他微生物的DNA發(fā)生交叉反應(yīng)。

5. 本產(chǎn)品足夠 50 次 20μL 體系的探針法熒光定量 PCR 反應(yīng)。

6. 本產(chǎn)品只能用于科研。 

幽門螺旋桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒規(guī)格及成分

 

編號(hào)

成分

規(guī)格

試劑一

2×Probe qPCR MagicMix

500 μL(本色蓋)

試劑二

熒光 PCR 模板稀釋液

1 mL(黃蓋)

試劑三

幽門螺旋桿菌PCR引物

100 μL(白蓋)

試劑四

幽門螺旋桿菌 qPCR 探針

50 μL(棕色管)

試劑五 

幽門螺旋桿菌陽性對照2.0

(1×10E8拷貝/μL)

 

50 μL(黃蓋)

試劑六 

天凈沙DNA釋放劑試用裝

50次(試用裝

 

試劑七

使用手冊

1 份

運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸、-20℃保存,有效期一年。

自備試劑  樣品DNA

使用方法 一、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例)。 由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能 污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原, 本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,只提供無傳染性的 DNA 段作為陽性對照。

1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。

2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液,用帶芯槍頭, 下同)。

3. 在 7 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照(試劑盒提供),充分震 蕩 1 分鐘,得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

4. 換槍頭,在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所 得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

5. 換槍頭,在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所 得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

二、樣品 DNA 的制備

7. 如果有 N 個(gè)樣品,好設(shè)置 N+2 個(gè)提取,多出的一個(gè)是 PC(樣品制備陽性 對照),一個(gè)是 NC(樣品制備陰性對照)??梢杂?10μL 陽性對照的 10000 倍稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣,以此作為 PC。另外用水作為 NC。

8. 用自選方法純化樣品的 DNA,本試劑盒跟市場上大多數(shù) DNA 提取試劑盒兼 容。

三、Probe qPCR 反應(yīng)(20μL 體系,在樣品制備室進(jìn)行)

9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù),則標(biāo)記 N+9 個(gè) PCR 管,其中 N+2 個(gè) 用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品,1 個(gè)用于 PCR 陰性對照(用水做模板),6 個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析,并且只做 1 次重復(fù),則標(biāo)記 N+4 個(gè) PCR 管,其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品,1 個(gè)用于 PCR 陰性對照(用 水做模板),1 個(gè)用于 PCR 陽性對照(用第 4 號(hào)管的陽性對照稀釋液做模 板)。下面只以定量分析為例描述操作步驟。

10. 在標(biāo)記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對照設(shè) 置完畢后才設(shè)置陽性對照,并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲(chǔ)存好 后后加):

成分

樣品管

N+2個(gè)

PCR陰性對照管

標(biāo)準(zhǔn)曲線

樣品管(2-7管)

2×Probe qPCR MagicMix(本色蓋)

10 μL

10 μL

各10 μL

幽門螺旋桿菌 qPCR探針(綠

2 μL

2 μL

各2 μL

幽門螺旋桿菌 PCR引物混合液(白

2 μL

2 μL

2 μL

 待測樣品DNA模板

6 μL

不加

不加

第7步所得標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品稀釋液(2-7號(hào)

不加

不加

各6 μL(2號(hào)樣到2號(hào)管,3號(hào)樣到3號(hào)管

11.蓋上蓋子后上機(jī),按下面參數(shù)進(jìn)行PCR:

過程

溫度

時(shí)間

預(yù)變性

94

5 min

PCR反應(yīng)

40個(gè)循環(huán))

94

0.5 min

50

0.5 min(采集FAM通道的熒光信號(hào)

72℃

0.5 min

后延伸

72

?10min

五、數(shù)據(jù)處理
12.以陽性對照濃度的log值為橫軸,以Ct值為縱軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測樣品的Ct值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品DNA濃度的log值,再推算出其濃度。
六、電泳檢測
如果有必要電泳確認(rèn),可取10-20μL PCR產(chǎn)物直接在瓊脂糖凝膠上電泳產(chǎn)物的大小為400 bp。但電泳非常容易污染實(shí)驗(yàn)環(huán)境,建議不輕易采納。 

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