乙型肝炎病毒cccDNA PCR試劑盒

Echinococcus granulosus

產(chǎn)品及特點

乙型肝炎病毒（HBV）共價閉合環(huán)狀 DNA（covalently closed circular DNA，cccDNA）是乙肝病毒前基因組 RNA 復(fù)制的原始模板，雖含量較少，每 個肝細(xì)胞內(nèi)只有約 5-50 個拷貝，但對乙肝病毒的復(fù)制以及感染狀態(tài)的建立具 有十分重要的意義，只有清除了 cccDNA，才能*消除乙肝患者病毒攜帶狀 態(tài)。因此 cccDNA 的檢測具有重要的臨床意義。本產(chǎn)品是基于常規(guī) PCR 技術(shù) 的乙肝病毒 cccDNA 快速檢測試劑盒。它具有下列特點：

1. 即開即用，用戶只需要提供病毒 DNA 模板。

2. 引物經(jīng)過精心優(yōu)化，專一性強(qiáng)，只擴(kuò)增乙肝炎病毒 cccDNA。

3. 提供陽性對照，便于區(qū)分假陰性樣品。

4. PCR mix 中含上樣染料，PCR 后可以直接上樣電泳。

5. 本試劑盒足夠做 40μL 體系的 PCR 50 次。

6. 本產(chǎn)品只能用于科研。

乙型肝炎病毒cccDNA PCR試劑盒規(guī)格及成分

運輸及保存 低溫運輸，-20℃保存，保存期限為一年。陽性對照需要單獨放置，不要污染其 他試劑。 

自備試劑 樣品 DNA。

使用方法 一、樣品 DNA 的制備

1. 如果有 N 個樣品，必須設(shè)置 N+2 個提取，多出的一個是 PC（樣品制備陽 性對照），一個是 NC（樣品制備陰性對照）。可以用 10μL 陽性對照的 1 千倍稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此 作為 PC。另外用水作為 NC。

2. 用自選方法純化樣品的 DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)寄生蟲 DNA 提取 試劑盒兼容。 

二、設(shè)置 PCR 反應(yīng)（40μL 體系）

3. 對 N+2 個樣品，在 PCR 時需要增加一個 PCR 陽性對照和一個 PCR 陰性 對照，故需要設(shè)置 N+4 個反應(yīng)。在 N+4 個 PCR 管中分別加入下列成分： 

4. 按下表設(shè)置 PCR 反應(yīng)：

三、電泳檢測

5. 取 10-20 μL PCR 產(chǎn)物。電泳檢測 PCR 產(chǎn)物。本產(chǎn)品提供的 PCR Mix 在 擴(kuò)增結(jié)束后可以直接上樣，不需要另外再加 loading buffer。PCR 產(chǎn)物陽 性對照必須有 551bp 大小的條帶出現(xiàn)，陰性對照必須無任何擴(kuò)增，否則實 驗無效。對沒有擴(kuò)增產(chǎn)物的樣品，可以稀釋 10 倍后重復(fù) PCR 擴(kuò)增以排除 PCR 抑制劑的感染。