牛分枝桿菌PCR試劑盒

Mycobacterium bovis

產(chǎn)品及特點

牛分枝桿菌(Mycobacterium bovis)是引起牛結(jié)核病的主要病原體，舊稱 牛型結(jié)核分枝桿菌，對牛和其他家畜有致病性。形態(tài)、染色和生長特性與人型 結(jié)核分枝桿菌基本相似。在抗原結(jié)構(gòu)上，牛型菌株與人型菌株有共同抗原存在， 因而可用減毒的牛分枝桿菌(即卡介苗)接種預(yù)防人的結(jié)核病。本菌能引起牛、馬、 豬的進行性和致死性結(jié)核病。對綿羊和山羊也可引起進行性結(jié)核病，但不常見。 人對本菌也易感，特別是兒童，絕大多數(shù)病例受害部位為淋巴結(jié)和腹腔器官， 肺部受侵害的不常見。因此牛分枝桿菌的檢測具有重要的意義。本試劑盒根據(jù) PCR 原理開發(fā)，它具有下列特點：

1. 即開即用，用戶只需要提供細(xì)菌 DNA 模板。

2. 引物經(jīng)過精心優(yōu)化，專一性強，只擴增牛分枝桿菌。

3. 提供陽性對照，便于區(qū)分假陰性樣品。

4. PCR mix 中含上樣染料，PCR 后可以直接上樣電泳。

5. 本試劑盒足夠做 40μL 體系的 PCR 50 次。

6. 本產(chǎn)品只能用于科研。

牛分枝桿菌PCR試劑盒規(guī)格及成分

運輸及保存 低溫運輸，-20℃保存，保存期限為一年。陽性對照需要單獨放置，不要污染其 他試劑。 

自備試劑 樣品 DNA。

使用方法 一、樣品 DNA 的制備

1. 如果有 N 個樣品，必須設(shè)置 N+2 個提取，多出的一個是 PC（樣品制備陽 性對照），一個是 NC（樣品制備陰性對照）。可以用 10μL 陽性對照的 1 千倍稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此 作為 PC。另外用水作為 NC。

2. 用自選方法純化樣品的 DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)寄生蟲 DNA 提取 試劑盒兼容。 

二、設(shè)置 PCR 反應(yīng)（40μL 體系）

3. 對 N+2 個樣品，在 PCR 時需要增加一個 PCR 陽性對照和一個 PCR 陰性 對照，故需要設(shè)置 N+4 個反應(yīng)。在 N+4 個 PCR 管中分別加入下列成分： 

4. 按下表設(shè)置 PCR 反應(yīng)：

三、電泳檢測

5. 取 10-20 μL PCR 產(chǎn)物。電泳檢測 PCR 產(chǎn)物。本產(chǎn)品提供的 PCR Mix 在 擴增結(jié)束后可以直接上樣，不需要另外再加 loading buffer。PCR 產(chǎn)物陽 性對照必須有 551bp 大小的條帶出現(xiàn)，陰性對照必須無任何擴增，否則實 驗無效。對沒有擴增產(chǎn)物的樣品，可以稀釋 10 倍后重復(fù) PCR 擴增以排除 PCR 抑制劑的感染。