人支原體PCR試劑盒

Mycoplasma hominis

產(chǎn)品及特點

支原體（mycoplasma）是 1898 年 Nocard 等發(fā)現(xiàn)的一種類似細(xì)菌但不具 有胞壁的原核微生物，能在無生命的人工培養(yǎng)基上生長繁殖，直徑 50-300nm， 能通過細(xì)菌濾器。又稱霉形體，為目前發(fā)現(xiàn)的小的簡單的原核生物，支原 體細(xì)胞中可見的細(xì)胞器是核糖體(支原體是原核細(xì)胞，原核細(xì)胞的細(xì)胞器只 有核糖體)?；蚪M多為雙鏈 DNA，散布于整個細(xì)胞內(nèi)沒有形成的核區(qū)或擬核。 與泌尿生殖道感染有關(guān)的主要是分解尿素支原體和人型支原體兩種，約有 20-30%的非淋菌性尿道炎的病人，是由以上兩種支原體引起的，是非淋菌性 尿道炎及宮頸炎的第二大致病菌。因此對支原體進(jìn)行快速靈敏的診斷具有重要 的意義。本產(chǎn)品就是為此目的根據(jù) PCR 原理開發(fā)的產(chǎn)品，它具有下列特點：

1. 即開即用，用戶只需要提供細(xì)菌 DNA 模板。

2. 引物經(jīng)過精心優(yōu)化，專一性強，只擴(kuò)增支原體 DNA，但跟其他微生物無交 叉反應(yīng)。 

3. 提供陽性對照，便于區(qū)分假陰性樣品。

4. PCR mix 中含上樣染料，PCR 后可以直接上樣電泳。

5. 本試劑盒足夠做 40μL 體系的 PCR 50 次。

6. 本產(chǎn)品只能用于科研。

人支原體PCR試劑盒規(guī)格及成分

運輸及保存 低溫運輸，-20℃保存，保存期限為一年。陽性對照需要單獨放置，不要污染其 他試劑。 

自備試劑 樣品 DNA。

使用方法 一、樣品 DNA 的制備

1. 如果有 N 個樣品，必須設(shè)置 N+2 個提取，多出的一個是 PC（樣品制備陽 性對照），一個是 NC（樣品制備陰性對照）。可以用 10μL 陽性對照的 1 千倍稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此 作為 PC。另外用水作為 NC。

2. 用自選方法純化樣品的 DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)寄生蟲 DNA 提取 試劑盒兼容。 

二、設(shè)置 PCR 反應(yīng)（40μL 體系）

3. 對 N+2 個樣品，在 PCR 時需要增加一個 PCR 陽性對照和一個 PCR 陰性 對照，故需要設(shè)置 N+4 個反應(yīng)。在 N+4 個 PCR 管中分別加入下列成分： 

4. 按下表設(shè)置 PCR 反應(yīng)：

三、電泳檢測

5. 取 10-20 μL PCR 產(chǎn)物。電泳檢測 PCR 產(chǎn)物。本產(chǎn)品提供的 PCR Mix 在 擴(kuò)增結(jié)束后可以直接上樣，不需要另外再加 loading buffer。PCR 產(chǎn)物陽 性對照必須有 551bp 大小的條帶出現(xiàn)，陰性對照必須無任何擴(kuò)增，否則實 驗無效。對沒有擴(kuò)增產(chǎn)物的樣品，可以稀釋 10 倍后重復(fù) PCR 擴(kuò)增以排除 PCR 抑制劑的感染。