支原體通用PCR試劑盒

Mycoplasma spp.

產(chǎn)品及特點(diǎn)

支原體和親緣關(guān)系很近的無膽甾原體等統(tǒng)稱霉形體。霉形體是目前發(fā)現(xiàn)的 小的的原核生物。它們?nèi)狈?xì)胞壁、有變形能力、能通過濾菌器、可 在無生命培養(yǎng)基中生長繁殖，成為細(xì)胞培養(yǎng)中常見的一種污染源，嚴(yán)重影響細(xì) 胞生長率、細(xì)胞形態(tài)、基因表達(dá)、細(xì)胞代謝和細(xì)胞活力。因此，對以支原體為 主的霉形體進(jìn)行早期檢測非常重要，它能使得研究人員在污染擴(kuò)散前快速采取 有效措施，減低損失。本試劑盒是根據(jù) PCR 原理開發(fā)，具有下列特點(diǎn)：

1. 免 DNA 制備，直接用裂解液做 PCR，更加簡單快捷。

2. 覆蓋廣，根據(jù) 16S rDNA 保守區(qū)設(shè)計引物，能檢測 40 余種霉形體（包 括歐盟藥典要求檢測的 9 種支原體）。

3. 特異性高，跟梭狀芽孢桿菌、鏈球菌和乳酸桿菌等親緣關(guān)系相近的微生物 無交叉反應(yīng)。

4. 靈敏高，可檢測低至幾個拷貝/反應(yīng)的支原體污染。

5. 提供內(nèi)參和無感染性的支原體陽性對照（DNA 段），能有效避免實驗結(jié) 果的假陽性和假陰性。

6. 可用于培養(yǎng)細(xì)胞、疫苗、血清、重組蛋白和耗材的污染檢測。但不能用于 臨床診斷。

7. 本產(chǎn)品足夠至少 50 次 40 μL 體系 PCR 檢測(含陽性對照和陰性對照反 應(yīng))。 

支原體通用PCR試劑盒規(guī)格及成分

運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限為一年。陽性對照需要單獨(dú)放置，不要污染其 他試劑。 

自備試劑 樣品 DNA。

使用方法 一、樣品 DNA 的制備

1. 如果有 N 個樣品，必須設(shè)置 N+2 個提取，多出的一個是 PC（樣品制備陽 性對照），一個是 NC（樣品制備陰性對照）?？梢杂?10μL 陽性對照的 1 千倍稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此 作為 PC。另外用水作為 NC。

2. 用自選方法純化樣品的 DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)寄生蟲 DNA 提取 試劑盒兼容。 

二、設(shè)置 PCR 反應(yīng)（40μL 體系）

3. 對 N+2 個樣品，在 PCR 時需要增加一個 PCR 陽性對照和一個 PCR 陰性 對照，故需要設(shè)置 N+4 個反應(yīng)。在 N+4 個 PCR 管中分別加入下列成分： 

4. 按下表設(shè)置 PCR 反應(yīng)：

三、電泳檢測

5. 取 10-20 μL PCR 產(chǎn)物。電泳檢測 PCR 產(chǎn)物。本產(chǎn)品提供的 PCR Mix 在 擴(kuò)增結(jié)束后可以直接上樣，不需要另外再加 loading buffer。PCR 產(chǎn)物陽 性對照必須有 551bp 大小的條帶出現(xiàn)，陰性對照必須無任何擴(kuò)增，否則實 驗無效。對沒有擴(kuò)增產(chǎn)物的樣品，可以稀釋 10 倍后重復(fù) PCR 擴(kuò)增以排除 PCR 抑制劑的感染。