豬圓環(huán)病毒3型PCR試劑盒

Porcine Circovirus 3 (PCV-3)

產(chǎn)品及特點(diǎn)

豬圓環(huán)病毒（porcine circovirus，PCV）在分類學(xué)上屬圓環(huán)病毒科圓環(huán)病 毒屬，為已知的小的動(dòng)物病毒之一。病毒粒子直徑 14－17nm，呈 20 面體 對稱結(jié)構(gòu)，無囊膜，含有共價(jià)閉合的單股環(huán)狀負(fù)鏈 DNA，基因組大小約為 1.76kb。PCV 對外界理化因子的抵抗力相當(dāng)強(qiáng)。PCV3 于 2016 年*在美國 報(bào)道，與母豬丘疹性皮炎、腎病綜合征和流產(chǎn)相關(guān)。因此快速檢測豬圓環(huán)病毒 3 型具有重要意義。本產(chǎn)品就是根據(jù)豬圓環(huán)病毒 3 型保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開發(fā)的 高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品，它具有下列特點(diǎn)：

1. 即開即用，用戶只需要提供 DNA 模板。

2. 引物經(jīng)過精心優(yōu)化，專一性強(qiáng)，只擴(kuò)增豬圓環(huán)病毒 3 型，與其他病原沒有 交叉反應(yīng)。

3. 提供陽性對照，便于區(qū)分假陰性樣品。

4. PCR mix 中含上樣染料，PCR 后可以直接上樣電泳。

5. 本試劑盒足夠做 40μL 體系的 PCR 50 次，但只能用于科研。

豬圓環(huán)病毒3型PCR試劑盒規(guī)格及成分

運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限為一年。陽性對照需要單獨(dú)放置，不要污染其 他試劑。 

自備試劑 樣品 DNA。

使用方法 一、樣品 DNA 的制備

1. 如果有 N 個(gè)樣品，必須設(shè)置 N+2 個(gè)提取，多出的一個(gè)是 PC（樣品制備陽 性對照），一個(gè)是 NC（樣品制備陰性對照）?？梢杂?10μL 陽性對照的 1 千倍稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此 作為 PC。另外用水作為 NC。

2. 用自選方法純化樣品的 DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)寄生蟲 DNA 提取 試劑盒兼容。 

二、設(shè)置 PCR 反應(yīng)（40μL 體系）

3. 對 N+2 個(gè)樣品，在 PCR 時(shí)需要增加一個(gè) PCR 陽性對照和一個(gè) PCR 陰性 對照，故需要設(shè)置 N+4 個(gè)反應(yīng)。在 N+4 個(gè) PCR 管中分別加入下列成分： 

4. 按下表設(shè)置 PCR 反應(yīng)：

三、電泳檢測

5. 取 10-20 μL PCR 產(chǎn)物。電泳檢測 PCR 產(chǎn)物。本產(chǎn)品提供的 PCR Mix 在 擴(kuò)增結(jié)束后可以直接上樣，不需要另外再加 loading buffer。PCR 產(chǎn)物陽 性對照必須有 551bp 大小的條帶出現(xiàn)，陰性對照必須無任何擴(kuò)增，否則實(shí) 驗(yàn)無效。對沒有擴(kuò)增產(chǎn)物的樣品，可以稀釋 10 倍后重復(fù) PCR 擴(kuò)增以排除 PCR 抑制劑的感染。