真鯛虹彩病毒PCR試劑盒

Red Sea Bream Iridovirus(RSIV)

產(chǎn)品及特點

真鯛虹彩病毒(Red Sea Bream Iridovirus，RSIV)會引起真鯛虹彩病毒 病，主要是水平傳播，通過水平途徑在水體、餌料和魚體間進行傳播和感染， 主要危害幼魚，發(fā)病后死亡率高達 37.9%。病魚體色變黑，嗜睡，貧血癥狀明 顯；體表和鰓出血，鰓上有瘀斑，呈灰白色；脾臟肥大。病毒對魚體上皮組織和 內(nèi)皮組織親嗜性較強，對脾臟、腎臟等魚類造血器官和組織的破壞尤為嚴(yán)重， 從而導(dǎo)致病魚貧血、多器官衰竭而死亡，因此真鯛虹彩病毒的快速準(zhǔn)確鑒定對 該病的預(yù)防和檢疫有著重要作用。本產(chǎn)品就是根據(jù)真鯛虹彩病毒保守區(qū)設(shè)計引 物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品，它具有下列特點：

1. 即開即用，用戶只需要提供 DNA 模板。

2. 引物經(jīng)過精心優(yōu)化，專一性強，只擴增真鯛虹彩病毒，與其他病原沒有交 叉反應(yīng)。

3. 提供陽性對照，便于區(qū)分假陰性樣品。

4. PCR mix 中含上樣染料，PCR 后可以直接上樣電泳。

5. 本試劑盒足夠做 40μL 體系的 PCR 50 次，但只能用于科研。

真鯛虹彩病毒PCR試劑盒規(guī)格及成分

運輸及保存 低溫運輸，-20℃保存，保存期限為一年。陽性對照需要單獨放置，不要污染其 他試劑。 

自備試劑 樣品 DNA。

使用方法 一、樣品 DNA 的制備

1. 如果有 N 個樣品，必須設(shè)置 N+2 個提取，多出的一個是 PC（樣品制備陽 性對照），一個是 NC（樣品制備陰性對照）。可以用 10μL 陽性對照的 1 千倍稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此 作為 PC。另外用水作為 NC。

2. 用自選方法純化樣品的 DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)寄生蟲 DNA 提取 試劑盒兼容。 

二、設(shè)置 PCR 反應(yīng)（40μL 體系）

3. 對 N+2 個樣品，在 PCR 時需要增加一個 PCR 陽性對照和一個 PCR 陰性 對照，故需要設(shè)置 N+4 個反應(yīng)。在 N+4 個 PCR 管中分別加入下列成分： 

4. 按下表設(shè)置 PCR 反應(yīng)：

三、電泳檢測

5. 取 10-20 μL PCR 產(chǎn)物。電泳檢測 PCR 產(chǎn)物。本產(chǎn)品提供的 PCR Mix 在 擴增結(jié)束后可以直接上樣，不需要另外再加 loading buffer。PCR 產(chǎn)物陽 性對照必須有 551bp 大小的條帶出現(xiàn)，陰性對照必須無任何擴增，否則實 驗無效。對沒有擴增產(chǎn)物的樣品，可以稀釋 10 倍后重復(fù) PCR 擴增以排除 PCR 抑制劑的感染。