剛地弓形蟲PCR試劑盒

Toxophasma gondii

產(chǎn)品及特點

剛地弓形蟲（Toxoplasma gondii）是一種可感染包括人在內(nèi)所有溫血動物 的細胞內(nèi)寄生原蟲，對人畜的危害很大，孕婦感染弓形蟲后導致早產(chǎn)、流產(chǎn)、胎 兒發(fā)育畸形，是當今致畸胎的四大原因之一，也是免疫功能低下患者死亡的主要 原因（如 AIDS 病人等）。傳統(tǒng)的顯微鏡病原體檢查方法，檢出率低；以抗體檢 測為主的血清學診斷方法不能準確反映弓形蟲現(xiàn)時感染情況。PCR 檢測技術的發(fā) 展為解決這些問題提供了更靈敏的方法。本產(chǎn)品就是以 PCR 技術為基礎開發(fā)的 專門檢測剛地弓形蟲的試劑盒，它具有下列特點： 

1. 即開即用，用戶只需要提供樣品 DNA。

2. 引物經(jīng)過優(yōu)化，靈敏性高。 3. 提供陽性對照，便于區(qū)分假陰性樣品。

4. 特異性高，引物是根據(jù)崗地弓形蟲高度保守的、長為 529 bp 的重復序列設 計。

5. PCR mix 中含上樣染料，PCR 后可以直接上樣電泳。

6. 本產(chǎn)品足夠 50 次 40uL 體系的常規(guī) PCR。

7. 本產(chǎn)品只能用于科研，不能用于臨床。

剛地弓形蟲PCR試劑盒規(guī)格及成分

運輸及保存 低溫運輸，-20℃保存，保存期限為 12 個月。

自備試劑 樣品 DNA。

使用方法 一、樣品 DNA 的制備

1. 如果有 N 個樣品，必須設置 N+2 個提取，多出的一個是 PC（樣品制備陽 性對照），一個是 NC（樣品制備陰性對照）?？梢杂?10μL 陽性對照的 1 千倍稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此 作為 PC。另外用水作為 NC。

2. 用自選方法純化樣品的 DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)寄生蟲 DNA 提取 試劑盒兼容。 

二、陽性對照

3、為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體細菌做陽性對 照，只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DNA 段作為陽性對照。

4、用本試劑盒的陽性對照原液稀釋制備陽性對照工作液時，由于陽性對照原液 濃度非常高，一定要注意不要污染本試劑盒的其他試劑和成分。

三、設置 PCR 反應（40uL 體系）

5、對 N+2 個樣品，在 PCR 時需要增加一個 PCR 陽性對照和一個 PCR 陰性對 照，故需要設置 N+4 個反應。在 N+4 個 PCR 管中分別加入下列成分： 

四、PCR 反應參數(shù) 

五、電泳檢測

6、取 10-20 μL PCR 產(chǎn)物。電泳檢測 PCR 產(chǎn)物。本產(chǎn)品提供的 PCR Mix 在 擴增結(jié)束后可以直接上樣，不需要另外再加 loading buffer。預期的 PCR 產(chǎn) 物長度為 212bp。陽性對照必須有此條帶出現(xiàn)，陰性對照必須無任何擴增， 否則實驗無效。對沒有擴增產(chǎn)物的樣品，可以稀釋 10 倍后重復 PCR 擴增以 排除 PCR 抑制劑的感染。