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當(dāng)前位置:上海信裕生物科技有限公司>>PCR試劑盒>>PCR-染料法>> 50次弧菌通用染料法熒光定量PCR試劑盒
產(chǎn)品型號(hào)50次
品 牌其他品牌
廠商性質(zhì)生產(chǎn)商
所 在 地上海
更新時(shí)間:2020-08-14 16:42:59瀏覽次數(shù):509次
聯(lián)系我時(shí),請(qǐng)告知來自 化工儀器網(wǎng)供貨周期 | 一周 | 規(guī)格 | 50T |
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貨號(hào) | XY-0744 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè) |
主要用途 | 熒光定量PCR具有更高的擴(kuò)增效率、更高的擴(kuò)增靈敏度、更高的擴(kuò)增特異性。 |
弧菌通用染料法熒光定量PCR試劑盒
Vibrio spp.
產(chǎn)品及特點(diǎn)
弧菌(Vibrio spp.)是菌體短小,彎曲成弧形,尾部帶一鞭毛的革蘭氏陰性菌。弧菌屬廣泛分布于河口、海灣、近岸海域的海水和海洋動(dòng)物體內(nèi)。該菌引起的食物中毒經(jīng)烹飪不當(dāng)?shù)暮.a(chǎn)品或鹽腌制品所傳播。常見的為海蟄、海魚、海蝦及各種貝類,因食物容器或砧板生熟不分污染本菌后,也可發(fā)生食物中毒。該菌常年均可發(fā)生,可從自限性腹瀉至中度霍亂樣病癥,有腹痛、腹瀉、嘔吐和低熱,糞便多為水樣,少數(shù)為血水樣,恢復(fù)較快,病后免疫力不強(qiáng),可重復(fù)感染,該菌還可引起淺表創(chuàng)傷感染、敗血癥等,給人體健康帶來嚴(yán)重?fù)p害,因此弧菌檢測具有重要的意義。熒光定量PCR是檢測傳染性疾病的主流技術(shù),本產(chǎn)品就是以染料法熒光定量PCR技術(shù)為基礎(chǔ)開發(fā)的專門檢測弧菌的試劑盒,它具有下列特點(diǎn):
1. 即開即用,用戶只需要提供 DNA 模板。
2.特異性高,引物是根據(jù)人弧菌高度保守區(qū)設(shè)計(jì),不會(huì)擴(kuò)增其他細(xì)菌。
3. 引物和擴(kuò)增體系經(jīng)過優(yōu)化,靈敏性比常規(guī) PCR 高 100 倍。
4. 提供無傳染性的 PCR 陽性對(duì)照,便于區(qū)分假陰性樣品。
5. 一管式操作,熒光 PCR 檢測,不容易產(chǎn)生環(huán)境污染。
6. 本產(chǎn)品只能用于科研,本試劑盒足夠 50 次 20μL 體系的 PCR。
弧菌通用染料法熒光定量PCR試劑盒規(guī)格及成分
編號(hào) | 成分 | 規(guī)格 |
試劑一 | 2×PCR MagicMix | 500μL(棕色) |
試劑二 | 熒光 PCR 模板稀釋液 | 1 mL(黃蓋) |
試劑三 | 弧菌PCR引物混合液 | 100 μL(白蓋) |
試劑四 | 弧菌PCR陽性對(duì)照 (1×10E8拷貝/μL) | 50μL(紅蓋) |
試劑五 | 天凈沙核酸釋放劑試用裝 | 20 次(1mL,綠蓋)) |
試劑六 | 使用手冊(cè) | 1 份 |
運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸,-20℃保存,保存期限為 12 個(gè)月。
自備試劑 樣品 DNA。
使用方法 一、制備標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品(以10E2-10E7拷貝/μL這6個(gè)10倍稀釋度為例)。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對(duì)照,只提供無傳染性的DNA段作為陽性對(duì)照。
1.標(biāo)記6個(gè)離心管,分別為7,6,5,4,3,2。
2.用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR模板稀釋液,用帶芯槍頭,下同)。
3.在7號(hào)管中加入5 μL 陽性對(duì)照(其濃度為1×10E8拷貝/μL,試劑盒提供),充分震蕩1分鐘,得1×10E7拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
4.換槍頭,在6號(hào)管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E6拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
5.換槍頭,在5號(hào)管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL 的陽性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E5拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
6.重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品DNA的制備
7.用自選方法純化樣品的DNA,本產(chǎn)品跟市場上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容。
8.如果有N個(gè)樣品,則需要進(jìn)行N+2個(gè)樣品提取,多出的一個(gè)用作樣品制備陽性對(duì)照管、另一個(gè)用作樣品制備陰性對(duì)照管。
三、設(shè)置qPCR反應(yīng)(20μL體系,在樣品制備室進(jìn)行)
9.如果進(jìn)行定量分析,則標(biāo)記N+9個(gè)PCR管,其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)樣品,1個(gè)用于PCR陰性對(duì)照,6個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。如果做定性分析,則6個(gè)標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品只選一個(gè)做(可以選4號(hào),其余樣品不變)。以下只介紹定量分析的反應(yīng)設(shè)置。
10.在標(biāo)記管中按下表加入各成分:
成分 | 樣品管 N+2 個(gè) | PCR 陰性 對(duì)照管 | 標(biāo)準(zhǔn)曲線 樣品管(2-7 管) |
2×qPCR MagicMix | 10 μL | 10 μL | 各 10 μL |
弧菌 PCR引物混合液 | 2 μL | 2 μL | 各 2 μL |
自備 10×ROX (見注) | 2 μL | 2 μL | 各 2 μL |
N+2 個(gè)待測樣品 DNA 模板 | 6 μL |
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自備超純水 | 6 μL | ||
第 7 步所得 PCR 陽性對(duì)照 稀釋液(2-7 號(hào)) |
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| 各 6μL(2 號(hào)樣到 2 號(hào)管,3 號(hào)樣到 3 號(hào)管…) |
11.蓋上蓋子后上機(jī),按下面參數(shù)進(jìn)行PCR(具體PCR參數(shù)可以根據(jù)儀器不同而自行優(yōu)化)。
四、熒光定量PCR反應(yīng)參數(shù)
過程 | 溫度 | 時(shí)間 |
預(yù)變性 | 94℃ | 5 min |
PCR反應(yīng) (40個(gè)循環(huán)) | 94℃ | 0.5 min |
50℃ | 0.5 min(采集SYBR通道的熒光信號(hào)) | |
72℃ | 0.5 min | |
后延伸 | 72℃ | 10 min |
五、數(shù)據(jù)處理
12.設(shè)定60℃-96℃范圍的融解曲線分析,排除假陽性。
13.如果把本試劑盒用于定量檢測,則以陽性對(duì)照濃度的log值為橫軸,以Ct值為縱軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測樣品的Ct值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品DNA濃度的log值,再推算出其濃度。
14.如果把本試劑盒用于定性檢測,只判斷陽性或陰性,則陰性對(duì)照Ct必須大于或等于40。陽性對(duì)照必須有熒光對(duì)數(shù)增長,有典型擴(kuò)增曲線,Ct值應(yīng)該小于或等于30。對(duì)待測樣品,如果其Ct大于或等于40則為陰性,如果小于或等于35則為陽性。如果在35-40之間,則重復(fù)一次。重復(fù)實(shí)驗(yàn)的Ct值如果大于或等于40則為陰性,如果小于40,則為陽性。
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