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人抗凝血素抗體(aPT1/aPT2)檢測(cè)試劑盒
本試劑僅供研究使用
試驗(yàn)原理:
aPT1/aPT2試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA).已知aPT1/aPT2濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。先將aPT1/aPT2物素標(biāo)記的抗體同時(shí)溫育。洗滌后,加入親和素標(biāo)記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌,去除未結(jié)合的酶結(jié)合物,然后加入底物A、B,和酶結(jié)合物同時(shí)作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中aPT1/aPT2的活性濃度呈比例關(guān)系。
人抗凝血素抗體(aPT1/aPT2)檢測(cè)試劑盒試劑盒內(nèi)容及其配制
試劑盒成份(2-8℃保存) | 96孔配置 | 48孔配置 | 配制 |
96/48份酶標(biāo)板 | 1塊板(96T) | 半塊板(48T) | 即用型 |
塑料膜板蓋 | 1塊 | 半塊 | 即用型 |
標(biāo)準(zhǔn)品:400ng/ml | 1瓶(0.6ml) | 1瓶(0.3ml) | 按說(shuō)明書進(jìn)行稀稀 |
空白對(duì)照 | 1瓶(1.0ml) | 1瓶(0.5ml) | 即用型 |
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋緩沖液 | 1瓶(5ml) | 1瓶(2.5ml) | 即用型 |
生物素標(biāo)記的aPT1/aPT2抗體 | 1瓶(6ml) | 1瓶(3.0ml) | 即用型 |
親和鏈酶素-HRP | 1瓶(10ml) | 1瓶(5.0ml) | 即用型 |
洗滌緩沖液 | 1瓶(20ml) | 1瓶(10ml) | 按說(shuō)明書進(jìn)行稀釋 |
底物A | 1瓶(6.0ml) | 1瓶(3.0ml) | 即用型 |
底物B | 1瓶(6.0ml) | 1瓶(3.0ml) | 即用型 |
終止液 | 1瓶(6.0ml) | 1瓶(3.0ml) | 即用型 |
自備材料
1. 蒸餾水。
2. 加樣器:5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。
3. 振蕩器及磁力攪拌器等。
安全性
1. 避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體,請(qǐng)盡快用水沖洗。
2. 實(shí)驗(yàn)中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
3. 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。
人抗凝血素抗體(aPT1/aPT2)檢測(cè)試劑盒操作注意事項(xiàng)
1. 試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
2. 實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
3. 不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
4. 使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器。
5. 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
6. 洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
7. 底物A應(yīng)揮發(fā),避免長(zhǎng)時(shí)間打開蓋子。底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
8. 加入試劑的順序應(yīng)*,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
9. 按照說(shuō)明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
樣品收集、處理及保存方法
1、 血清-----操作過程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2、 血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測(cè)。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
3、 細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4、 保存------如果樣品不立即使用,應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存,避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測(cè)前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
人抗凝血素抗體(aPT1/aPT2)檢測(cè)試劑盒試劑的準(zhǔn)備
1. 標(biāo)準(zhǔn)品:標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋應(yīng)在實(shí)驗(yàn)時(shí)準(zhǔn)備,不能儲(chǔ)存。稀釋前將標(biāo)準(zhǔn)品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進(jìn)行:
400ng/ml | (6號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品) | 原倍濃度不用稀釋直接加入50ul。 |
200ng/ml | (5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品) | 100ul的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
100ng/ml | (4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品) | 100ul的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
50ng/ml | (3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品) | 100ul的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
25ng/ml | (2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品) | 100ul的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
12.5ng/ml | (1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品) | 100ul的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
0ng/ml | (空白對(duì)照) | 原始濃度不用稀釋直接加入50ul。 |
2. 洗滌緩沖液(50×)的稀釋:蒸餾水50倍稀釋。
操作步驟
1. 使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,以免加樣時(shí)加入大量的氣泡,產(chǎn)生加樣上的誤差。
2. 根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來(lái)定,能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。
3. 加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測(cè)樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時(shí)。
4. 甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
5. 每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。
6. 甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
7. 每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘。避免光照。
8. 取出酶標(biāo)板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應(yīng)立即測(cè)定結(jié)果。
9. 在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。
性能
1. 靈敏度:zui小的檢測(cè)濃度小于1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。
2. 特異性:不與人其它細(xì)胞因子反應(yīng)。
3. 重復(fù)性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
4.局限性:6號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品以上的結(jié)果為非線性的,根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線無(wú)法得到精確的結(jié)果。
結(jié)果 判 斷 與 分 析
1、儀器值:于波長(zhǎng)450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值
2、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)(Y),相應(yīng)的aPT1/aPT2標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)(X),做得相應(yīng)的曲線,樣品的aPT1/aPT2含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度。
3、檢測(cè)值范圍:0-400ng/ml
4、敏感度: 1.0ng/mlxyH650Ra 【中文名稱】:大鼠黑素瘤抑制性活性蛋白1(MIA1)ELISA試劑盒 【英文名稱】:ELISA Kit for Melanoma Inhibitory Activity Protein 1 (MIA1) 【靈敏度】:9.375pg/mL
xyD977Ra 【中文名稱】:大鼠腎上腺素能受體α2C(ADRα2C)ELISA試劑盒 【英文名稱】:ELISA Kit for Adrenergic ReHZptor Alpha 2C (ADRa2C) 【靈敏度】:9.375pg/mL
xyB074Mu 【中文名稱】:小鼠多聚免疫球蛋白受體(PIGR)ELISA試劑盒 【英文名稱】:ELISA Kit for Polymeric Immunoglobulin ReHZptor (PIGR) 【靈敏度】:9.375pg/mL
xyC268Ra 【中文名稱】:大鼠11-β-羥基類固醇脫氫酶1(HSD11β1)ELISA試劑盒 【英文名稱】:ELISA Kit for 11-Beta-Hydroxysteroid DehydrogenaHZ Type 1 (HSD11b1) 【靈敏度】:9.375pg/mL
xyG850Ra 【中文名稱】:大鼠促泌素(SCGN)ELISA試劑盒 【英文名稱】:ELISA Kit for HZcretagogin (SCGN) 【靈敏度】:9.375pg/mL
xyA595Ra 【中文名稱】:大鼠凝血因子Ⅵ(F6)ELISA試劑盒 【英文名稱】:ELISA Kit for Coagulation Factor VI (F6) 【靈敏度】:9.375pg/mL
xyL817Ra 【中文名稱】:大鼠無(wú)翅型MMTV整合位點(diǎn)家族成員4(WNT4)ELISA試劑盒 【英文名稱】:ELISA Kit for Wingless Type MMTV Integration Site Family, Member 4 (WNT4) 【靈敏度】:9.375pg/mL
xyB995Ra 【中文名稱】:大鼠血幼素(HJV)ELISA試劑盒 【英文名稱】:ELISA Kit for Hemojuvelin (HJV) 【靈敏度】:9.375pg/mL
xyA464Ra 【中文名稱】:大鼠鹽皮質(zhì)激素受體(MR)ELISA試劑盒 【英文名稱】:ELISA Kit for Mineralocorticoid ReHZptor (MR) 【靈敏度】:9.375pg/mL
xyE801Ra 【中文名稱】:大鼠AMPA離子能谷氨酸受體1(GRIA1)ELISA試劑盒 【英文名稱】:ELISA Kit for Glutamate ReHZptor, Ionotropic, AMPA 1 (GRIA1) 【靈敏度】:9.375pg/mL
xyE805Ra 【中文名稱】:大鼠N-甲基-D-天氡氨酸離子能谷氨酸受體1(GRIN1)ELISA試劑盒 【英文名稱】:ELISA Kit for Glutamate ReHZptor, Ionotropic, N-Methyl-D-Aspartate 1 (GRIN1) 【靈敏度】:9.375pg/mL
xyB634Ra 【中文名稱】:大鼠骨骼肌肌動(dòng)蛋白α1(ACTα1)ELISA試劑盒 【英文名稱】:ELISA Kit for Actin Alpha 1, Skeletal Muscle (ACTa1) 【靈敏度】:9.375pg/mL
xyD419Ra 【中文名稱】:大鼠肌球蛋白重鏈6(MYH6)ELISA試劑盒 【英文名稱】:ELISA Kit for Myosin Heavy Chain 6, Cardiac Muscle, Alpha (MYH6) 【靈敏度】:9.375pg/mL
xyF836Ra 【中文名稱】:大鼠轉(zhuǎn)化受體電位陽(yáng)離子通道亞家族M成員6(TRPM6)ELISA試劑盒 【英文名稱】:ELISA Kit for Transient ReHZptor Potential Cation Channel Subfamily M, Member 6 (TRPM6) 【靈敏度】:9.375pg/mL
xyF837Ra 【中文名稱】:大鼠轉(zhuǎn)化受體電位陽(yáng)離子通道亞家族M成員7(TRPM7)ELISA試劑盒 【英文名稱】:ELISA Kit for Transient ReHZptor Potential Cation Channel Subfamily M, Member 7 (TRPM7) 【靈敏度】:9.375pg/mL
xyB626Ra 【中文名稱】:大鼠白介素10受體α(IL10Rα)ELISA試劑盒 【英文名稱】:ELISA Kit for Interleukin 10 ReHZptor Alpha (IL10Ra) 【靈敏度】:9.375pg/mL
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