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人補(bǔ)體蛋白3(C3) 檢測試劑盒
本試劑僅供研究使用
試驗原理:
C3試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA).已知C3濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測。先將C3物素標(biāo)記的抗體同時溫育。洗滌后,加入親和素標(biāo)記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌,去除未結(jié)合的酶結(jié)合物,然后加入底物A、B,和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中C3的活性濃度呈比例關(guān)系。
人補(bǔ)體蛋白3(C3) 檢測試劑盒試劑盒內(nèi)容及其配制
試劑盒成份(2-8℃保存) | 96孔配置 | 48孔配置 | 配制 |
96/48份酶標(biāo)板 | 1塊板(96T) | 半塊板(48T) | 即用型 |
塑料膜板蓋 | 1塊 | 半塊 | 即用型 |
標(biāo)準(zhǔn)品:400ng/ml | 1瓶(0.6ml) | 1瓶(0.3ml) | 按說明書進(jìn)行稀稀 |
空白對照 | 1瓶(1.0ml) | 1瓶(0.5ml) | 即用型 |
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋緩沖液 | 1瓶(5ml) | 1瓶(2.5ml) | 即用型 |
生物素標(biāo)記的C3抗體 | 1瓶(6ml) | 1瓶(3.0ml) | 即用型 |
親和鏈酶素-HRP | 1瓶(10ml) | 1瓶(5.0ml) | 即用型 |
洗滌緩沖液 | 1瓶(20ml) | 1瓶(10ml) | 按說明書進(jìn)行稀釋 |
底物A | 1瓶(6.0ml) | 1瓶(3.0ml) | 即用型 |
底物B | 1瓶(6.0ml) | 1瓶(3.0ml) | 即用型 |
終止液 | 1瓶(6.0ml) | 1瓶(3.0ml) | 即用型 |
自備材料
1. 蒸餾水。
2. 加樣器:5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。
3. 振蕩器及磁力攪拌器等。
安全性
1. 避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體,請盡快用水沖洗。
2. 實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
3. 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。
人補(bǔ)體蛋白3(C3) 檢測試劑盒操作注意事項
1. 試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
2. 實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
3. 不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
4. 使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器。
5. 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
6. 洗滌酶標(biāo)板時應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
7. 底物A應(yīng)揮發(fā),避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。
8. 加入試劑的順序應(yīng)*,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。
9. 按照說明書中標(biāo)明的時間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
樣品收集、處理及保存方法
1、 血清-----操作過程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2、 血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
3、 細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4、 保存------如果樣品不立即使用,應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存,避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
人補(bǔ)體蛋白3(C3) 檢測試劑盒試劑的準(zhǔn)備
1. 標(biāo)準(zhǔn)品:標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋應(yīng)在實驗時準(zhǔn)備,不能儲存。稀釋前將標(biāo)準(zhǔn)品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進(jìn)行:
400ng/ml | (6號標(biāo)準(zhǔn)品) | 原倍濃度不用稀釋直接加入50ul。 |
200ng/ml | (5號標(biāo)準(zhǔn)品) | 100ul的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
100ng/ml | (4號標(biāo)準(zhǔn)品) | 100ul的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
50ng/ml | (3號標(biāo)準(zhǔn)品) | 100ul的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
25ng/ml | (2號標(biāo)準(zhǔn)品) | 100ul的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
12.5ng/ml | (1號標(biāo)準(zhǔn)品) | 100ul的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
0ng/ml | (空白對照) | 原始濃度不用稀釋直接加入50ul。 |
2. 洗滌緩沖液(50×)的稀釋:蒸餾水50倍稀釋。
操作步驟
1. 使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產(chǎn)生加樣上的誤差。
2. 根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。
3. 加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時。
4. 甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
5. 每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。
6. 甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
7. 每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘。避免光照。
8. 取出酶標(biāo)板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。
9. 在450nm波長處測定各孔的OD值。
性能
1. 靈敏度:zui小的檢測濃度小于1號標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。
2. 特異性:不與人其它細(xì)胞因子反應(yīng)。
3. 重復(fù)性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
4.局限性:6號標(biāo)準(zhǔn)品以上的結(jié)果為非線性的,根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線無法得到精確的結(jié)果。
結(jié)果 判 斷 與 分 析
1、儀器值:于波長450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值
2、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)(Y),相應(yīng)的C3標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)(X),做得相應(yīng)的曲線,樣品的C3含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度。
3、檢測值范圍:0-400ng/ml
4、敏感度: 1.0ng/mlxyA764Ra 【中文名稱】:大鼠叉頭框蛋白O1(FOXO1)ELISA試劑盒 【英文名稱】:ELISA Kit for Forkhead Box Protein O1 (FOXO1) 【靈敏度】:9.375pg/mL
xyA959Ra 【中文名稱】:大鼠L1-細(xì)胞粘附分子(L1CAM)ELISA試劑盒 【英文名稱】:ELISA Kit for L1-HZll Adhesion Molecule (L1CAM) 【靈敏度】:9.375pg/mL
xyB659Ra 【中文名稱】:大鼠胰島素樣生長因子1受體(IGF1R)ELISA試劑盒 【英文名稱】:ELISA Kit for Insulin Like Growth Factor 1 ReHZptor (IGF1R) 【靈敏度】:9.375pg/mL
xyB540Ra 【中文名稱】:大鼠細(xì)胞外基質(zhì)金屬蛋白酶誘導(dǎo)因子(EMMPRIN)ELISA試劑盒 【英文名稱】:ELISA Kit for ExtraHZllular Matrix MetalloproteinaHZ InduHZr (EMMPRIN) 【靈敏度】:9.375pg/mL
xyC959Ra 【中文名稱】:大鼠淀粉樣蛋白β前體蛋白結(jié)合蛋白B3(APBB3)ELISA試劑盒 【英文名稱】:ELISA Kit for Amyloid Beta Precursor Protein Binding Protein B3 (APBB3) 【靈敏度】:9.375pg/mL
xyC956Ra 【中文名稱】:大鼠淀粉樣蛋白β前體蛋白結(jié)合蛋白2(APPBP2)ELISA試劑盒 【英文名稱】:ELISA Kit for Amyloid Beta Precursor Protein Binding Protein 2 (APPBP2) 【靈敏度】:9.375pg/mL
xyD522Ra 【中文名稱】:大鼠90kDa熱休克蛋白αB1(HSP90αB1)ELISA試劑盒 【英文名稱】:ELISA Kit for Heat Shock Protein 90kDa Alpha B1 (HSP90aB1) 【靈敏度】:9.375pg/mL
xyA365Ra 【中文名稱】:大鼠和肽素(CPP)ELISA試劑盒 【英文名稱】:ELISA Kit for Copeptin (CPP) 【靈敏度】:9.375pg/mL
xyA204Ra 【中文名稱】:大鼠生長停滯特異性蛋白6(GAS6)ELISA試劑盒 【英文名稱】:ELISA Kit for Growth Arrest Specific Protein 6 (GAS6) 【靈敏度】:9.375pg/mL
xyA711Ra 【中文名稱】:大鼠肝素酶(HPA)ELISA試劑盒 【英文名稱】:ELISA Kit for HeparanaHZ (HPA) 【靈敏度】:9.375pg/mL
xyB049Ra 【中文名稱】:大鼠三葉因子1(TFF1)ELISA試劑盒 【英文名稱】:ELISA Kit for Trefoil Factor 1 (TFF1) 【靈敏度】:9.375pg/mL
xyB249Ra 【中文名稱】:大鼠腫瘤壞死因子受體超家族成員5(TNFRSF5)ELISA試劑盒 【英文名稱】:ELISA Kit for Tumor Necrosis Factor ReHZptor Superfamily, Member 5 (TNFRSF5) 【靈敏度】:9.375pg/mL
xyC026Ra 【中文名稱】:大鼠Salusinβ蛋白(Salusinβ)ELISA試劑盒 【英文名稱】:ELISA Kit for Salusin Beta 【靈敏度】:9.375pg/mL
xyC918Ra 【中文名稱】:大鼠成纖維細(xì)胞生長因子21(FGF21)ELISA試劑盒 【英文名稱】:ELISA Kit for Fibroblast Growth Factor 21 (FGF21) 【靈敏度】:9.375pg/mL
xyD179Ra 【中文名稱】:大鼠核連蛋白1(NUCB1)ELISA試劑盒 【英文名稱】:ELISA Kit for Nucleobindin 1 (NUCB1) 【靈敏度】:9.375pg/mL
xyD180Ra 【中文名稱】:大鼠核連蛋白2(NUCB2)ELISA試劑盒 【英文名稱】:ELISA Kit for Nucleobindin 2 (NUCB2) 【靈敏度】:9.375pg/mL
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