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人抗腎小管基底膜抗體(TBM)ELISA 試劑盒
本試劑僅供研究使用
試驗原理:
TBM試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA).已知TBM濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內(nèi)進行檢測。先將TBM物素標記的抗體同時溫育。洗滌后,加入親和素標記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌,去除未結(jié)合的酶結(jié)合物,然后加入底物A、B,和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中TBM的活性濃度呈比例關(guān)系。
人抗腎小管基底膜抗體(TBM)ELISA 試劑盒試劑盒內(nèi)容及其配制
試劑盒成份(2-8℃保存) | 96孔配置 | 48孔配置 | 配制 |
96/48份酶標板 | 1塊板(96T) | 半塊板(48T) | 即用型 |
塑料膜板蓋 | 1塊 | 半塊 | 即用型 |
標準品:400ng/ml | 1瓶(0.6ml) | 1瓶(0.3ml) | 按說明書進行稀稀 |
空白對照 | 1瓶(1.0ml) | 1瓶(0.5ml) | 即用型 |
標準品稀釋緩沖液 | 1瓶(5ml) | 1瓶(2.5ml) | 即用型 |
生物素標記的TBM抗體 | 1瓶(6ml) | 1瓶(3.0ml) | 即用型 |
親和鏈酶素-HRP | 1瓶(10ml) | 1瓶(5.0ml) | 即用型 |
洗滌緩沖液 | 1瓶(20ml) | 1瓶(10ml) | 按說明書進行稀釋 |
底物A | 1瓶(6.0ml) | 1瓶(3.0ml) | 即用型 |
底物B | 1瓶(6.0ml) | 1瓶(3.0ml) | 即用型 |
終止液 | 1瓶(6.0ml) | 1瓶(3.0ml) | 即用型 |
自備材料
1. 蒸餾水。
2. 加樣器:5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。
3. 振蕩器及磁力攪拌器等。
安全性
1. 避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體,請盡快用水沖洗。
2. 實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
3. 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。
人抗腎小管基底膜抗體(TBM)ELISA 試劑盒操作注意事項
1. 試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存。
2. 實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
3. 不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
4. 使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器。
5. 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
6. 洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
7. 底物A應揮發(fā),避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
8. 加入試劑的順序應*,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
9. 按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
樣品收集、處理及保存方法
1、 血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2、 血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
3、 細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4、 保存------如果樣品不立即使用,應將其分成小部分-70 ℃保存,避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
人抗腎小管基底膜抗體(TBM)ELISA 試劑盒試劑的準備
1. 標準品:標準品的系列稀釋應在實驗時準備,不能儲存。稀釋前將標準品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進行:
400ng/ml | (6號標準品) | 原倍濃度不用稀釋直接加入50ul。 |
200ng/ml | (5號標準品) | 100ul的原倍標準品加入100ul的標準品稀釋液 |
100ng/ml | (4號標準品) | 100ul的5號標準品加入100ul的標準品稀釋液 |
50ng/ml | (3號標準品) | 100ul的4號標準品加入100ul的標準品稀釋液 |
25ng/ml | (2號標準品) | 100ul的3號標準品加入100ul的標準品稀釋液 |
12.5ng/ml | (1號標準品) | 100ul的2號標準品加入100ul的標準品稀釋液 |
0ng/ml | (空白對照) | 原始濃度不用稀釋直接加入50ul。 |
2. 洗滌緩沖液(50×)的稀釋:蒸餾水50倍稀釋。
操作步驟
1. 使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產(chǎn)生加樣上的誤差。
2. 根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,能使用復孔的盡量做復孔。
3. 加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時。
4. 甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
5. 每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。
6. 甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
7. 每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘。避免光照。
8. 取出酶標板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應立即測定結(jié)果。
9. 在450nm波長處測定各孔的OD值。
性能
1. 靈敏度:zui小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。
2. 特異性:不與人其它細胞因子反應。
3. 重復性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
4.局限性:6號標準品以上的結(jié)果為非線性的,根據(jù)此標準曲線無法得到精確的結(jié)果。
結(jié)果 判 斷 與 分 析
1、儀器值:于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值
2、以吸光度OD值為縱坐標(Y),相應的TBM標準品濃度為橫坐標(X),做得相應的曲線,樣品的TBM含量可根據(jù)其OD值由標準曲線換算出相應的濃度。
3、檢測值范圍:0-400ng/ml
4、敏感度: 1.0ng/mlxyA855Hu 【中文名稱】:人核因子κB受體激活因子配基(RANκL)ELISA試劑盒 【英文名稱】:ELISA Kit for ReHZptor Activator Of Nuclear Factor Kappa B Ligand (RANkL) 【靈敏度】:9.375pg/mL
xyA372Hu 【中文名稱】:人凝溶膠蛋白(GS)ELISA試劑盒 【英文名稱】:ELISA Kit for Gelsolin (GS) 【靈敏度】:9.375pg/mL
xyA878Hu 【中文名稱】:人血管生成素樣蛋白1(ANGPTL1)ELISA試劑盒 【英文名稱】:ELISA Kit for Angiopoietin Like Protein 1 (ANGPTL1) 【靈敏度】:9.375pg/mL
xyA860Hu 【中文名稱】:人上皮中性粒細胞激活肽78(ENA78)ELISA試劑盒 【英文名稱】:ELISA Kit for Epithelial Neutrophil Activating Peptide 78 (ENA78) 【靈敏度】:9.375pg/mL
xyA371Hu 【中文名稱】:人10kDa干擾素γ誘導蛋白(IP10)ELISA試劑盒 【英文名稱】:ELISA Kit for Interferon Gamma InduHZd Protein 10kDa (IP10) 【靈敏度】:9.375pg/mL
xyA373Hu 【中文名稱】:人結(jié)蛋白(Des)ELISA試劑盒 【英文名稱】:ELISA Kit for Desmin (Des) 【靈敏度】:9.375pg/mL
xyA376Hu 【中文名稱】:人輔肌動蛋白α2(ACTN2)ELISA試劑盒 【英文名稱】:ELISA Kit for Actinin Alpha 2 (ACTN2) 【靈敏度】:9.375pg/mL
xyB895Hu 【中文名稱】:人甘露聚糖結(jié)合凝集素關(guān)聯(lián)絲氨酸蛋白酶1(MASP1)ELISA試劑盒 【英文名稱】:ELISA Kit for Mannose Associated Serine Protease 1 (MASP1) 【靈敏度】:9.375pg/mL
xyB538Hu 【中文名稱】:人細胞胱硫醚γ裂解酶(CSE)ELISA試劑盒 【英文名稱】:ELISA Kit for Cystathionine Gamma Lyase (CSE) 【靈敏度】:9.375pg/mL
xyB899Hu 【中文名稱】:人前胰淀粉樣蛋白(ProIAPP)ELISA試劑盒 【英文名稱】:ELISA Kit for Proislet Amyloid Polypeptide (ProIAPP) 【靈敏度】:9.375pg/mL
xyB901Hu 【中文名稱】:人激活素受體樣激酶1(ALK1)ELISA試劑盒 【英文名稱】:ELISA Kit for Activin ReHZptor Like Kinase 1 (ALK1) 【靈敏度】:9.375pg/mL
xyB902Hu 【中文名稱】:人心肌鈣黏蛋白(CDHH)ELISA試劑盒 【英文名稱】:ELISA Kit for Cadherin, Heart (CDHH) 【靈敏度】:9.375pg/mL
xyB903Hu 【中文名稱】:人纖維膠凝蛋白3(FCN3)ELISA試劑盒 【英文名稱】:ELISA Kit for Ficolin 3 (FCN3) 【靈敏度】:9.375pg/mL
xyB904Hu 【中文名稱】:人血小板膜糖蛋白Ⅵ(GP6)ELISA試劑盒 【英文名稱】:ELISA Kit for Glycoprotein VI, Plaet (GP6) 【靈敏度】:9.375pg/mL
xyB907Hu 【中文名稱】:人纖維膠凝蛋白2(FCN2)ELISA試劑盒 【英文名稱】:ELISA Kit for Ficolin 2 (FCN2) 【靈敏度】:9.375pg/mL
xyB908Hu 【中文名稱】:人聚集蛋白聚糖(AGC)ELISA試劑盒 【英文名稱】:ELISA Kit for Aggrecan (AGC) 【靈敏度】:9.375pg/mL
xyB909Hu 【中文名稱】:人p53上調(diào)凋亡調(diào)節(jié)因子(PUMA)ELISA試劑盒 【英文名稱】:ELISA Kit for p53 Upregulated Modulator Of Apoptosis (PUMA) 【靈敏度】:9.375pg/mL
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