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大鼠多巴胺轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(DAT) ELISA 試劑盒
本試劑僅供研究使用
試驗(yàn)原理:
DAT試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA).已知DAT濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。先將DAT和生物素標(biāo)記的抗體同時(shí)溫育。洗滌后,加入親和素標(biāo)記過(guò)的HRP。再經(jīng)過(guò)溫育和洗滌,去除未結(jié)合的酶結(jié)合物,然后加入底物A、B,和酶結(jié)合物同時(shí)作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中DAT的活性濃度呈比例關(guān)系。
大鼠多巴胺轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(DAT) ELISA 試劑盒試劑盒內(nèi)容及其配制
試劑盒成份(2-8℃保存) | 96孔配置 | 48孔配置 | 配制 |
96/48份酶標(biāo)板 | 1塊板(96T) | 半塊板(48T) | 即用型 |
塑料膜板蓋 | 1塊 | 半塊 | 即用型 |
標(biāo)準(zhǔn)品:400ng/ml | 1瓶(0.6ml) | 1瓶(0.3ml) | 按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行稀稀 |
空白對(duì)照 | 1瓶(1.0ml) | 1瓶(0.5ml) | 即用型 |
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋緩沖液 | 1瓶(5ml) | 1瓶(2.5ml) | 即用型 |
生物素標(biāo)記的抗DAT抗體 | 1瓶(6ml) | 1瓶(3.0ml) | 即用型 |
親和鏈酶素-HRP | 1瓶(10ml) | 1瓶(5.0ml) | 即用型 |
洗滌緩沖液 | 1瓶(20ml) | 1瓶(10ml) | 按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行稀釋 |
底物A | 1瓶(6.0ml) | 1瓶(3.0ml) | 即用型 |
底物B | 1瓶(6.0ml) | 1瓶(3.0ml) | 即用型 |
終止液 | 1瓶(6.0ml) | 1瓶(3.0ml) | 即用型 |
自備材料
1. 蒸餾水。
2. 加樣器:5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。
3. 振蕩器及磁力攪拌器等。
安全性
1. 避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體,請(qǐng)盡快用水沖洗。
2. 實(shí)驗(yàn)中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
3. 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。
大鼠多巴胺轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(DAT) ELISA 試劑盒操作注意事項(xiàng)
1. 試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書(shū)儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
2. 實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
3. 不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
4. 使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器。
5. 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
6. 洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
7. 底物A應(yīng)揮發(fā),避免長(zhǎng)時(shí)間打開(kāi)蓋子。底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
8. 加入試劑的順序應(yīng)*,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
9. 按照說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
樣品收集、處理及保存方法
1、 血清-----操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2、 血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測(cè)。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
3、 細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4、 保存------如果樣品不立即使用,應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存,避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測(cè)前先離心或過(guò)濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
大鼠多巴胺轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(DAT) ELISA 試劑盒試劑的準(zhǔn)備
1. 標(biāo)準(zhǔn)品:標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋?xiě)?yīng)在實(shí)驗(yàn)時(shí)準(zhǔn)備,不能儲(chǔ)存。稀釋前將標(biāo)準(zhǔn)品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進(jìn)行:
400ng/ml | (6號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品) | 原倍濃度不用稀釋直接加入50ul。 |
200ng/ml | (5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品) | 100ul的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
100ng/ml | (4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品) | 100ul的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
50ng/ml | (3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品) | 100ul的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
25ng/ml | (2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品) | 100ul的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
12.5ng/ml | (1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品) | 100ul的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
0ng/ml | (空白對(duì)照) | 原始濃度不用稀釋直接加入50ul。 |
2. 洗滌緩沖液(50×)的稀釋?zhuān)赫麴s水50倍稀釋。
操作步驟
1. 使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,以免加樣時(shí)加入大量的氣泡,產(chǎn)生加樣上的誤差。
2. 根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來(lái)定,能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。
3. 加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測(cè)樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時(shí)。
4. 甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
5. 每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。
6. 甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
7. 每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘。避免光照。
8. 取出酶標(biāo)板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應(yīng)立即測(cè)定結(jié)果。
9. 在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。
性能
1. 靈敏度:zui小的檢測(cè)濃度小于1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。
2. 特異性:不與人其它細(xì)胞因子反應(yīng)。
3. 重復(fù)性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
4.局限性:6號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品以上的結(jié)果為非線性的,根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線無(wú)法得到精確的結(jié)果。
結(jié)果 判 斷 與 分 析
1、儀器值:于波長(zhǎng)450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值
2、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)(Y),相應(yīng)的DAT標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)(X),做得相應(yīng)的曲線,樣品的DAT含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度。
3、檢測(cè)值范圍:0-400ng/ml
4、敏感度: 1.0ng/mlxyG685Hu 【中文名稱】:人肌鈀蛋白(MYPN)ELISA試劑盒 【英文名稱】:ELISA Kit for Myopalladin (MYPN) 【靈敏度】:9.375pg/mL
xyG291Hu 【中文名稱】:人鳥(niǎo)苷酸環(huán)化酶激活因子2A(GUCA2A)ELISA試劑盒 【英文名稱】:ELISA Kit for Guanylate Cyclase Activator 2A (GUCA2A) 【靈敏度】:9.375pg/mL
xyL122Hu 【中文名稱】:人GM2神經(jīng)節(jié)苷脂激活因子(GM2A)ELISA試劑盒 【英文名稱】:ELISA Kit for GM2 Ganglioside Activator (GM2A) 【靈敏度】:9.375pg/mL
xyD089Hu 【中文名稱】:人溶酶體酸性磷酸酶2(ACP2)ELISA試劑盒 【英文名稱】:ELISA Kit for Acid Phosphatase 2, Lysosomal (ACP2) 【靈敏度】:9.375pg/mL
xyB280Hu 【中文名稱】:人組織蛋白酶D(CTSD)ELISA試劑盒 【英文名稱】:ELISA Kit for Cathepsin D (CTSD) 【靈敏度】:9.375pg/mL
xyD058Hu 【中文名稱】:人中性鞘磷脂酶(NSMASE)ELISA試劑盒 【英文名稱】:ELISA Kit for Neutral Sphingomyelinase (NSMASE) 【靈敏度】:9.375pg/mL
xyA048Hu 【中文名稱】:人抑制素βE(INHβE)ELISA試劑盒 【英文名稱】:ELISA Kit for Inhibin Beta E (INHbE) 【靈敏度】:9.375pg/mL
xyL418Hu 【中文名稱】:人DEAD框肽5(DDX5)ELISA試劑盒 【英文名稱】:ELISA Kit for DEAD Box Polypeptide 5 (DDX5) 【靈敏度】:9.375pg/mL
xyD775Hu 【中文名稱】:人蛋白二硫化物異構(gòu)酶A5(PDIA5)ELISA試劑盒 【英文名稱】:ELISA Kit for Protein Disulfide Isomerase A5 (PDIA5) 【靈敏度】:9.375pg/mL
xyH571Hu 【中文名稱】:人核小體裝配蛋白1樣1(NAP1L1)ELISA試劑盒 【英文名稱】:ELISA Kit for Nucleosome Assembly Protein 1 Like Protein 1 (NAP1L1) 【靈敏度】:9.375pg/mL
xyG324Hu 【中文名稱】:人妊娠帶蛋白(PZP)ELISA試劑盒 【英文名稱】:ELISA Kit for Pregnancy Zone Protein (PZP) 【靈敏度】:9.375pg/mL
xyF102Hu 【中文名稱】:人精氨酸/絲氨酸豐富剪接因子2(SRSF2)ELISA試劑盒 【英文名稱】:ELISA Kit for Serine/Arginine Rich Splicing Factor 2 (SRSF2) 【靈敏度】:9.375pg/mL
xyE824Hu 【中文名稱】:人醛脫氫酶1家族成員A1(ALDH1A1)ELISA試劑盒 【英文名稱】:ELISA Kit for Aldehyde Dehydrogenase 1 Family, Member A1 (ALDH1A1) 【靈敏度】:9.375pg/mL
xyE174Hu 【中文名稱】:人前列腺蛋白類(lèi)脂肪酶B(LIPB)ELISA試劑盒 【英文名稱】:ELISA Kit for Lipophilin B, Prostatein Like (LIPB) 【靈敏度】:9.375pg/mL
xyC598Hu 【中文名稱】:人血管非炎性蛋白1(VNN1)ELISA試劑盒 【英文名稱】:ELISA Kit for Vanin 1 (VNN1) 【靈敏度】:9.375pg/mL
xyD798Hu 【中文名稱】:人拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱβ(TOP2β)ELISA試劑盒 【英文名稱】:ELISA Kit for Topoisomerase II Beta (TOP2b) 【靈敏度】:9.375pg/mL
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