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人β內(nèi)啡肽受體(β-EPR) 檢測試劑盒

本試劑僅供研究使用 

試驗原理：

β-EPR試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）.已知β-EPR濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內(nèi)進行檢測。先將β-EPR物素標記的抗體同時溫育。洗滌后，加入親和素標記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A、B，和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中β-EPR的活性濃度呈比例關(guān)系。

人β內(nèi)啡肽受體(β-EPR) 檢測試劑盒試劑盒內(nèi)容及其配制

自備材料

1．  蒸餾水。

2．  加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。

3．  振蕩器及磁力攪拌器等。

安全性

1．  避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗。

2．  實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。

3．  不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

人β內(nèi)啡肽受體(β-EPR) 檢測試劑盒操作注意事項

1．  試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存。

2．  實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。

3．  不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。

4．  使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。

5．  使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。

6．  洗滌酶標板時應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。

7．  底物A應揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。

8．  加入試劑的順序應*，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。

9．  按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

樣品收集、處理及保存方法

1、  血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

2、  血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。

3、  細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4、  保存------如果樣品不立即使用，應將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

人β內(nèi)啡肽受體(β-EPR) 檢測試劑盒試劑的準備

1．  標準品：標準品的系列稀釋應在實驗時準備，不能儲存。稀釋前將標準品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進行：

2．  洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋。

操作步驟

1．  使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。

2．  根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復孔的盡量做復孔。

3．  加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時。

4．  甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。

5．  每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。

6．  甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。

7．  每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。

8．  取出酶標板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應立即測定結(jié)果。

9．  在450nm波長處測定各孔的OD值。

性能

1. 靈敏度：zui小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。

2. 特異性：不與人其它細胞因子反應。

3. 重復性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。

4.局限性：6號標準品以上的結(jié)果為非線性的，根據(jù)此標準曲線無法得到精確的結(jié)果。

結(jié)果 判 斷 與 分 析

1、儀器值：于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值

2、以吸光度OD值為縱坐標（Y），相應的β-EPR標準品濃度為橫坐標（X），做得相應的曲線，樣品的β-EPR含量可根據(jù)其OD值由標準曲線換算出相應的濃度。

3、檢測值范圍：0-400ng/ml

4、敏感度： 1.0ng/mlxy-E10312    【中文名稱】：人黑色素瘤標記物(MART/Melan-A)ELISA試劑盒    【英文名稱】：Human melanoma markers (MART / Melan-A) ELISA Kit    【靈敏度】：9.375pg/mL
xy-E10313    【中文名稱】：人高分子量細胞角蛋白(CK-HMW)ELISA試劑盒    【英文名稱】：Human high molecular weight cytokeratin (CK-HMW) ELISA kit    【靈敏度】：9.375pg/mL
xy-E10314    【中文名稱】：人肝癌抗原(PHC)ELISA試劑盒    【英文名稱】：Human hepatocellular carcinoma antigen (PHC) ELISA kit    【靈敏度】：9.375pg/mL
xy-E10315    【中文名稱】：人凋亡蛋白酶激活因子1(Apaf-1)ELISA試劑盒    【英文名稱】：Human apoptotic protease activating factor 1 (Apaf-1) ELISA Kit    【靈敏度】：9.375pg/mL
xy-E10316    【中文名稱】：人鼻咽癌(NPC)ELISA試劑盒    【英文名稱】：Nasopharyngeal carcinoma (NPC) ELISA kit    【靈敏度】：9.375pg/mL
xy-E10317    【中文名稱】：人膀胱癌抗原(UBC)ELISA試劑盒    【英文名稱】：Human bladder cancer antigen (UBC) ELISA kit    【靈敏度】：9.375pg/mL
xy-E10318    【中文名稱】：人廣譜細胞角蛋白(P-CK)ELISA試劑盒    【英文名稱】：A broad spectrum of Human cytokeratin (P-CK) ELISA kit    【靈敏度】：9.375pg/mL
xy-E10319    【中文名稱】：人癌基因蛋白質(zhì)p190/bcr-abl ELISA試劑盒    【英文名稱】：Human oncogene protein p190/bcr-abl ELISA kit    【靈敏度】：9.375pg/mL
xy-E10320    【中文名稱】：人膀胱腫瘤抗原(BTA)ELISA試劑盒    【英文名稱】：Human bladder tumor antigen (BTA) ELISA kit    【靈敏度】：9.375pg/mL
xy-E10321    【中文名稱】：人中期因子(MK)ELISA試劑盒    【英文名稱】：Human midkine (MK) ELISA Kit    【靈敏度】：9.375pg/mL
xy-E10322    【中文名稱】：人BH3結(jié)構(gòu)域凋亡誘導蛋白(Bid)ELISA試劑盒    【英文名稱】：BH3 domains of Human apoptosis-inducing protein (Bid) ELISA kit    【靈敏度】：9.375pg/mL
xy-E10323    【中文名稱】：人B細胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)ELISA試劑盒    【英文名稱】：The Human B -cell lymphoma factor 2 (Bcl-2) ELISA Kit    【靈敏度】：9.375pg/mL
xy-E10324    【中文名稱】：人腫瘤特異生長因子/腫瘤相關(guān)因子(TGSF)ELISA試劑盒    【英文名稱】：Human tumor specific growth factor / tumor-associated factor (TGSF) ELISA kit    【靈敏度】：9.375pg/mL
xy-E10325    【中文名稱】：人色素上皮衍生因子(PEDF)ELISA試劑盒    【英文名稱】：Human pigment epithelium-derived factor (PEDF) ELISA kit    【靈敏度】：9.375pg/mL
xy-E10326    【中文名稱】：人克拉拉細胞蛋白(CC16) ELISA試劑盒    【英文名稱】：Clara cell protein (CC16) ELISA Kit    【靈敏度】：9.375pg/mL
xy-E10327    【中文名稱】：人低氧誘導因子1α(HIF-1α)ELISA試劑盒    【英文名稱】：Human hypoxia -inducible factor 1α (HIF-1α) ELISA kit    【靈敏度】：9.375pg/mL
xy-E10328    【中文名稱】：人黑色素細胞抗體(MC Ab)ELISA試劑盒    【英文名稱】：Human melanoma cell antibodies (MC Ab) ELISA kit    【靈敏度】：9.375pg/mL
xy-E10329    【中文名稱】：人轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(TFR/CD71)ELISA試劑盒    【英文名稱】：Human transferrin receptor (TFR/CD71) ELISA kit    【靈敏度】：9.375pg/mL
xy-E10330    【中文名稱】：人P53(P53)ELISA試劑盒    【英文名稱】：Human P53 (P53) ELISA kit    【靈敏度】：9.375pg/mL
xy-E10331    【中文名稱】：人細胞周期素D3(Cyclin-D3)ELISA試劑盒    【英文名稱】：Human cyclin D3 (Cyclin-D3) ELISA kit    【靈敏度】：9.375pg/mL
xy-E10332    【中文名稱】：人細胞周期素D2(Cyclin-D2)ELISA     【英文名稱】：Human cyclin D2 (Cyclin-D2) ELISA    【靈敏度】：9.375pg/mL
xy-E10333    【中文名稱】：人細胞周期素D1(Cyclin-D1)ELISA試劑盒    【英文名稱】：Human cyclin D1 (Cyclin-D1) ELISA kit    【靈敏度】：9.375pg/mL
xy-E10334    【中文名稱】：人內(nèi)皮抑素(ES)ELISA試劑盒    【英文名稱】：Human endostatin (ES) ELISA kit    【靈敏度】：9.375pg/mL
xy-E10335    【中文名稱】：人鐵蛋白(FE)ELISA試劑盒    【英文名稱】：Human ferritin (FE) ELISA Kit    【靈敏度】：9.375pg/mL