Phos-tag™ 凝膠熒光染料
Phos-tag™ 凝膠熒光染料，是一種可在生理pH范圍內(nèi)，對(duì)凝膠中的磷酸化蛋白進(jìn)行染色的熒光染料。進(jìn)行了SDS-PAGE，用本產(chǎn)品處理聚丙烯酰胺凝膠，可以對(duì)磷酸化蛋白進(jìn)行特異性染色。
本系列有波長(zhǎng)不同的Yellow（黃）、Magenta（品紅）、Cyan（藍(lán)綠）、Aqua（淺綠）四種顏色。每管規(guī)格為0.2 mg，可對(duì)約20個(gè)迷你凝膠進(jìn)行染色。

Phos-tag™ 凝膠熒光染料

 

 

Phos-tag™ 凝膠熒光染料，是一種可在生理pH范圍內(nèi)，對(duì)凝膠中的磷酸化蛋白進(jìn)行染色的熒光染料。進(jìn)行了SDS-PAGE，用本產(chǎn)品處理聚丙烯酰胺凝膠，可以對(duì)磷酸化蛋白進(jìn)行特異性染色。

本系列有波長(zhǎng)不同的Yellow（黃）、Magenta（品紅）、Cyan（藍(lán)綠）、Aqua（淺綠）四種顏色。每管規(guī)格為0.2 mg，可對(duì)約20個(gè)迷你凝膠進(jìn)行染色。

 

購(gòu)買(mǎi)前請(qǐng)注意：

使用Phos-tag^™ 凝膠熒光染料，需要用到Mixed reagents for Phos-tag™ Common Solution 5×（產(chǎn)品編號(hào)：383-15231）。請(qǐng)一同購(gòu)買(mǎi)。

 

 

 

◆特點(diǎn)

 

●　高靈敏度

●　在生理pH下即可染色

●　選擇性與pSer、 pTyr、 pHis以及pAsp殘基結(jié)合

●　無(wú)需放射性物質(zhì)、化學(xué)物質(zhì)標(biāo)簽、抗體

●　2小時(shí)內(nèi)完成染色

 

 

◆產(chǎn)品對(duì)比

 

 

其他公司產(chǎn)品A   ●　凝膠pH：2~4 ●　5個(gè)步驟（固定、清洗、染色、脫色、清洗） ●　所需時(shí)間：≧5小時(shí) ●　溶液更換次數(shù)：11次 ●　卵清蛋白檢測(cè)上限：～5 ng/lane

Phos-tag™ Magenda（品紅）   ●　凝膠pH：7~8（不進(jìn)行脫磷酸化） ●　3個(gè)步驟（固定、染色、清洗） ●　所需時(shí)間：≦2小時(shí) ●　溶液更換次數(shù)：4次 ●　卵清蛋白檢測(cè)上限：～1 ng/lane

 

 

◆應(yīng)用實(shí)例①

 

磷酸化蛋白與非磷酸化蛋白的染色Phos-tag™ Aqua（淺綠）

 

Lane.No.（）內(nèi)為磷酸基團(tuán)數(shù)目

 

1. Marker 2.α-酪蛋白（9P） 3.經(jīng)ALP處理的α-酪蛋白 4.β-酪蛋白（5P） 5.經(jīng)ALP處理的β-酪蛋白 6.卵清蛋白（2P）

7.經(jīng)ALP處理的卵清蛋白 8.胃蛋白酶（1P） 9.經(jīng)ALP處理的胃蛋白酶 10.β-半乳糖苷酶 11.牛血清白蛋白 12.碳酸酐酶

 

Phos-tag™ Aqua（淺綠）染料選擇性：用Phos-tag™ Aqua（淺綠）對(duì)10％（w/v）的PAGE膠進(jìn)行染色，其中分別含有四組完整的以及經(jīng)ALP（堿性磷酸酶）處理的磷酸蛋白（α-酪蛋白，β-酪蛋白，卵清蛋白和胃蛋白酶各1 μg）（左），然后使用考馬斯亮藍(lán)CBB G-250染色（右）。

成功特異性地檢測(cè)出SDS-PAGE后的磷酸化蛋白。

 

數(shù)據(jù)提供：廣島大學(xué)研究生院 醫(yī)學(xué)系科學(xué)研究科 醫(yī)藥分子機(jī)能科學(xué)研究室 木下惠美子老師、木下英司老師、小池透老師

 

 

◆應(yīng)用實(shí)例②

 

使用Phos-tag™ 熒光凝膠染料的組氨酸、天門(mén)冬氨酸的磷酸化分析

細(xì)菌通過(guò)將信息從組氨酸激酶EnvZ傳遞到應(yīng)答調(diào)控子OmpR來(lái)調(diào)節(jié)基因的表達(dá)。分別分析有自磷酸化能力的EnvZ激酶和被EnvZ催化的OmpR中組氨酸和天門(mén)冬氨酸的磷酸化。

 

 

 

可以確認(rèn)Phos-tag™ Magenta（品紅）和Phos-tag™ SDS-PAGE 這兩種試劑中的His和Asp的磷酸化隨激酶的處理時(shí)間經(jīng)過(guò)不斷增強(qiáng)。尤其是使用Phos-tag™ Magenta（品紅）時(shí)，可以僅檢測(cè)出His磷酸化或Asp磷酸化。

 

數(shù)據(jù)提供：廣島大學(xué)研究生院 醫(yī)學(xué)系科學(xué)研究科 醫(yī)藥分子機(jī)能科學(xué)研究室 木下惠美子老師、木下英司老師、小池透老師

 

 

◆應(yīng)用實(shí)例③

 

用于篩選組氨酸激酶抑制劑（新型抗生素）

使用Phos-tag™熒光凝膠染料，篩選組氨酸激酶抑制劑。

 

 

證實(shí)磷酸化依賴組氨酸激酶抑制劑濃度被抑制。

 

數(shù)據(jù)提供：廣島大學(xué)研究生院 醫(yī)學(xué)系科學(xué)研究科 醫(yī)藥分子機(jī)能科學(xué)研究室 木下惠美子老師、木下英司老師、小池透老師

 

 

參考文獻(xiàn)

 

“Quantitativemonitoring of His and Asp phosphorylation in a bacterial signaling system byusing Phos-tag Magenta/Cyan fluorescent dyes”, Emiko Kinoshita-Kikuta, HiroshiKusamoto, Syogo Ono, Keisuke Akayama, Yoko Eguchi, Masayuki Igarashi, ToshihideOkajima, Ryutaro Utsumi, Eiji Kinoshita, Tohru Koike, Electrophoresis, 2019

 

 

 

◆使用方法

 

※調(diào)整平衡及清洗溶液以及染色溶液必須使用Mixed reagents for Phos-tag™ Common Solution 5× (產(chǎn)品編號(hào)：383-15231)。

 

 

 

◆激發(fā)波長(zhǎng)/熒光波長(zhǎng)

 

Phos-tag™ Yellow（黃）	Phos-tag™ Magenta（品紅）
Ex/Em=505 nm/514 nm	Ex/Em=547 nm/561 nm
Phos-tag™ Cyan（藍(lán)綠）	Phos-tag™ Aqua（淺綠）
Ex/Em=643 nm/661nm	Ex/Em=551 nm/564 nm

 

 

◆產(chǎn)品列表

 

產(chǎn)品編號(hào)	產(chǎn)品名稱	規(guī)格
380-15241	Phos-tag™ 黃色熒光染料	0.2 mg
386-15221	Phos-tag™ 品紅熒光染料	0.2 mg
382-15201	Phos-tag™ 淺綠熒光染料	0.2 mg
389-15211	Phos-tag™ 藍(lán)綠熒光染料	0.2 mg
383-15231	Phos-tag™ 5×染色通用混合溶液	1 EA

 

 

◆相關(guān)產(chǎn)品

 

Phos-tag™ Acrylamide

 

產(chǎn)品編號(hào)	產(chǎn)品名稱	規(guī)格
304-93521	Phos-tag™ 丙烯酰胺	10 mg
300-93523		2 mg
304-93526	Phos-tag™ 丙烯酰胺5 mM水溶液	0.3 mL

 

 

SuperSep™ Phos-tag™

 

用于Bio-Rad伯樂(lè)電泳儀

貨號(hào)	品名	電泳儀	規(guī)格
198-17981	SuperSep™ Phos-tag™ (50 μmol/L), 7.5%, 17 well, 83×100×3.9mm	Mini-PROTEAN®  Tetra Cell (Bio-Rad Laboratories, Inc.)	5 塊
195-17991	SuperSep™ Phos-tag™ (50 μmol/L), 12.5%, 17 well, 83×100×3.9 mm		5 塊

 

 

用于Life Technologies伯樂(lè)電泳儀

貨號(hào)	品名	電泳儀	規(guī)格
192-18001	SuperSep™ Phos-tag™ (50 μmol/L), 7.5%, 17 well, 100×100×6.6 mm	XCell SureLock®  Mini-Cell (Life Technologies, Inc.)	5 塊
199-18011	SuperSep™ Phos-tag™ (50 μmol/L), 12.5%, 17 well, 100×100×6.6 mm		5 塊

 

Phos-tag™ Biotin

 

產(chǎn)品編號(hào)	產(chǎn)品名稱	規(guī)格
301-93531	Phos-tag™ 生物素	10 mg
308-97201	Phos-tag™ 生物素1 mM水溶液	0.1 mL

 

 

Phos-tag™ Agarose

 

產(chǎn)品編號(hào)	產(chǎn)品名稱	規(guī)格
302-93561	Phos-tag™ 瓊脂糖	0.5 mL
308-93563		3 mL

 

 

Phos-tag™ Tip

 

產(chǎn)品編號(hào)	產(chǎn)品名稱	規(guī)格
387-07321-8P	Phos-tag™ 瓊脂糖槍頭	8 pcs
387-07321		8 pcs×10

 

 

Phos-tag™ Mass Analytical Kit

 

產(chǎn)品編號(hào)	產(chǎn)品名稱	規(guī)格
305-93551	Phos-tag™ 質(zhì)譜分析試劑盒	1 set