甘油含量檢測(cè)試劑盒-甘油濃度測(cè)定

甘油是甘油三酯的水解產(chǎn)物。脂蛋白酯酶能水解血液中的甘油三酯；胰脂酶可以水解食物中的甘油三酯；激素敏感脂肪分解酶能水解脂肪細(xì)胞中的甘油三酯。與游離脂肪酸一樣，甘油含量是甘油三酯水解反應(yīng)的可靠檢測(cè)指標(biāo)，但檢測(cè)更方便。本試劑盒采用甘油磷酸氧化酶法和經(jīng)典GPO-Trinder酶學(xué)反應(yīng)相結(jié)合的方法，通過(guò)比色法測(cè)定液體樣本中的甘油含量。經(jīng)過(guò)優(yōu)化后，操作步驟更加簡(jiǎn)單，檢測(cè)線(xiàn)性范圍在10-1200µmol/L，可靠性和重復(fù)性俱佳，適合生物醫(yī)學(xué)、食品實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)。

甘油濃度測(cè)定：

參見(jiàn)下表進(jìn)行加樣。為使反應(yīng)時(shí)間盡量一致，減小實(shí)驗(yàn)誤差，可先加入標(biāo)準(zhǔn)品、待測(cè)樣品，然后再加入工作溶液。（注意：當(dāng)甘油濃度較低時(shí)，可將待測(cè)樣品與工作溶液按照100µl:100µl體積混合，然后再進(jìn)行測(cè)定，但是如果樣品體積超過(guò)100µl時(shí)將會(huì)稀釋工作液中酶的濃度，使反應(yīng)靈敏度下降。如果待測(cè)樣品濃度超過(guò)線(xiàn)性范圍，可進(jìn)行適當(dāng)稀釋?zhuān)缓蟾鶕?jù)稀釋倍數(shù)來(lái)計(jì)算樣品中甘油濃度。）

37oC或25oC反應(yīng) 10分鐘。反應(yīng)平衡后顏色在60分鐘內(nèi)穩(wěn)定。

先用蒸餾水+工作液的空白管調(diào)零，然后測(cè)定各管OD值。

繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)并計(jì)算甘油濃度。

附Excel作圖步驟：各標(biāo)準(zhǔn)管OD值為y軸，標(biāo)準(zhǔn)品濃度為x軸。(1)鼠標(biāo)左鍵圈住數(shù)據(jù)，點(diǎn)擊做圖向?qū)?，選擇-散點(diǎn)圖-，點(diǎn)擊-完成-。(2)鼠標(biāo)右鍵點(diǎn)圖上的某一點(diǎn)，點(diǎn)擊-添加趨勢(shì)線(xiàn)-，點(diǎn)擊-選項(xiàng)-，點(diǎn)擊-顯示公式-和-R2值-。

說(shuō)明：

1、維sheng素C>0.18g/L、血紅蛋白>2g/L、膽紅素>0.25g/L、二硫蘇糖醇、巰基乙醇、高濃度EDTA干擾測(cè)試。

2、正常血清甘油濃度為20-130µmol/L，細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)須用不含酚紅的無(wú)色無(wú)血清培養(yǎng)基，如果培養(yǎng)基中含有酚紅，可以選擇含有酚紅的無(wú)細(xì)胞培養(yǎng)基作為對(duì)照進(jìn)行測(cè)定

強(qiáng)堿條件下甘油和二價(jià)銅的絡(luò)合物顯絳藍(lán)色，所以利用甘油的這個(gè)特性就可以輕松搞定。主要試劑是AR級(jí)的甘油、氫氧化鈉、硫酸銅。向氫氧化鈉堿化的甘油溶液里加硫酸銅，一定要保證甘油被*絡(luò)合，并且保證多余的二價(jià)銅都以氫氧化銅沉淀形式存在，但是氫氧化鈉也不要加太多。甘油銅可見(jiàn)區(qū)大吸收波長(zhǎng)是在630nm。先作個(gè)標(biāo)準(zhǔn)系列，繪出吸光度-濃度曲線(xiàn)，然后把待測(cè)試樣吸光度測(cè)出來(lái)在標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)上一算，濃度就得到了。