免疫組化操作步驟

⑴、石蠟切片脫蠟至水。

⑵、 3%H 2 O 2 室溫孵育 5-10 分鐘，以消除內(nèi)源性過(guò)氧化物酶的活性。

⑶、蒸餾水沖洗， PBS 浸泡 5 分鐘 x2 （如需抗原修復(fù)，可在此步后進(jìn)行）。

⑷、 5-10% 正常山羊血清（PBS 稀釋）封閉，室溫孵育 10 分鐘，傾去血清，勿洗。滴加 一抗 工作液， 37 ℃ 孵育 1-2 小時(shí)或 4 ℃ 過(guò)一晚。

⑸、 PBS 沖洗， 5 分鐘 x3 次。

⑹、滴加適量 生物素標(biāo)記二抗工作液， 37 ℃ 孵育 10-30 分鐘。

⑺、 PBS 沖洗， 5 分鐘 x3 次。

⑻、滴加適量的 辣根酶或堿性磷酸酶標(biāo)記的鏈霉卵白素工作液， 37 ℃ 孵育 10-30 分鐘。

⑼、 PBS 沖洗， 5 分鐘 x3 次。

⑽、顯色劑顯色 3-15 分鐘（DAB 或 NBT/BCIP）

⑾、自來(lái)水充分沖洗，復(fù)染，脫水，透明，封片。

免疫組化染色步驟

冰凍切片 4-8um ，室溫放置 30 分鐘后，入 4 ℃丙酮固定 10分鐘，PBS洗，5分鐘x3，用過(guò)氧化氫孵育5-10分鐘，消除內(nèi)源性過(guò)氧化物酶的活性。

免疫組化判定分析

 免疫組化染色（IHC）

從實(shí)驗(yàn)結(jié)果而言，免疫組化技術(shù)服務(wù)主要涉及抗體實(shí)驗(yàn)結(jié)果的描述與分析，圖片的確定與選取，相關(guān)數(shù)據(jù)的提供，上述工作是免疫組化工作的重點(diǎn)內(nèi)容，只有嚴(yán)格的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)操作，專業(yè)化的結(jié)果分析才能更好的滿足客戶的要求，這點(diǎn)對(duì)于形式為腹水，上清，培養(yǎng)液之類的抗體顯得更為重要。關(guān)于上述服務(wù)內(nèi)容應(yīng)該在實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前由雙方明確，一般而言，客戶方實(shí)驗(yàn)前應(yīng)提出需要什么樣的結(jié)果與分析，例如是簡(jiǎn)要還是詳細(xì)的描述實(shí)驗(yàn)結(jié)果，需要實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)否，圖片的數(shù)量與規(guī)格等。如果為雙盲試驗(yàn)或有第三方參與，則事先申明。

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