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YPD Agar Medium 酵母

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更新時(shí)間:2021-02-05 09:31:28瀏覽次數(shù):161次

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主要用途 科研
YPD Agar Medium 酵母
在酵母雙雜交系統(tǒng)中,“誘餌"蛋白X克隆至DNA-BD載體中,表達(dá)DNA-BD/X融合蛋白;待測(cè)試蛋白Y克隆至AD載體中,表達(dá)AD/Y融合蛋白。一旦X與Y蛋白間有相互作用,則DNA-BD和AD也隨之被牽拉靠近,恢復(fù)行使功能,報(bào)告重組體中LacZ和HIS3基因的表達(dá)

YPD Agar Medium 酵母

 英文名:YPD Agar Medium

描述:YPD系列培養(yǎng)基屬于Rich medium,也可以稱為*培養(yǎng)基。YPD Medium 由精選的蛋白胨、酵母提取物和葡萄糖按適當(dāng)比例混合組成;YPDA培養(yǎng)基是在YPD培養(yǎng)基中添加了適量的硫酸腺嘌呤。YPD Agar、YPDA Agar分別在YPD、YPDA基礎(chǔ)上加入了Agar,作為固體培養(yǎng)基倒板用。YPD系列培養(yǎng)基用于釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)的常規(guī)培養(yǎng)。

 

使用方法:

Rich Liquid Media (Broth)  

  • 50克的YPD或者YPDA1升的去離子水中溶解。  

2. pH 值在6.0±0.2范圍內(nèi),調(diào)整pH。121℃高壓15分鐘。  

3. 避光、室溫條件下儲(chǔ)存培養(yǎng)基。  

Rich Plating Media with Agar  

  • 70克的YPD Agar或者YPDA Agar1升的去離子水中溶解(瓊脂在高壓后才能溶解)。
  • pH 值在6.0±0.2范圍內(nèi),調(diào)整pH。121℃高壓15分鐘。  
  • 冷卻到50℃把培養(yǎng)基倒入平板中,室溫使其凝固。封口膜封好后倒置保存在4℃冰箱。

為什么我做的平板不凝?  

自行添加Agar,務(wù)必選用AgarCA1331),添加量為20 g/L。固體培養(yǎng)基不凝固可能是由于pH值偏低或者時(shí)間過長(zhǎng)(也會(huì)降低pH值);水質(zhì)偏酸也會(huì)使得培養(yǎng)基偏酸,建議前調(diào)整YPD系列培養(yǎng)基的pH6.5。121℃,高壓15min,及時(shí)從鍋內(nèi)取出培養(yǎng)基。

 雙雜交系統(tǒng)的建立得力于對(duì)真核生物調(diào)控轉(zhuǎn)錄起始過程的認(rèn)識(shí)。細(xì)胞起始基因轉(zhuǎn)錄需要有反式轉(zhuǎn)錄因子的參與。80年代的工作表明, 轉(zhuǎn)錄因子在結(jié)構(gòu)上是組件式的(modular), 即這些因子往往由兩個(gè)或兩個(gè)以上相互的結(jié)構(gòu)域構(gòu)成,其中有DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域(DNA binding domain,簡(jiǎn)稱為BD)和轉(zhuǎn)錄結(jié)構(gòu)域(activation domain,簡(jiǎn)稱為AD),它們是轉(zhuǎn)錄因子發(fā)揮功能所的。單獨(dú)的BD雖然能和啟動(dòng)子結(jié)合,但是不能轉(zhuǎn)錄。而不同轉(zhuǎn)錄因子的BD和AD形成的雜合蛋白仍然具有正常的轉(zhuǎn)錄的功能。如酵母細(xì)胞的Gal4蛋白的BD與大腸桿菌的一個(gè)酸性結(jié)構(gòu)域B42融合得到的雜合蛋白仍然可結(jié)合到Gal4結(jié)合位點(diǎn)并轉(zhuǎn)錄。

在酵母雙雜交系統(tǒng)中,“誘餌”蛋白X克隆至DNA-BD載體中,表達(dá)DNA-BD/X融合蛋白;待測(cè)試蛋白Y克隆至AD載體中,表達(dá)AD/Y融合蛋白。一旦X與Y蛋白間有相互作用,則DNA-BD和AD也隨之被牽拉靠近,恢復(fù)行使功能,報(bào)告重組體中LacZ和HIS3基因的表達(dá)

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DO Supplement -Ade/-His/-Leu/-Trp/-Ura/-Met20g
DO Supplement -Ade/-His/-Leu/-Ura20g
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yyp2021.2.3

 

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