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Minimal SD Base 酵母

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更新時間:2021-02-05 09:30:10瀏覽次數(shù):350次

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Minimal SD Base 酵母
酵母單雜交早是1993年由Li等從酵母雙雜交發(fā)展而來,通過對報告基因的表型檢測,分析DNA與蛋白之間的相互作用,以研究真核細胞內(nèi)的基因表達調(diào)控。由于酵母單雜交方法檢測某些轉(zhuǎn)錄因子與順式作用元件專一性相互作用的敏感性和性,現(xiàn)已被用于克隆細胞中含量微弱的、用生化手段難以純化的某些轉(zhuǎn)錄因子。

Minimal SD Base 酵母

 描述:

SDsynthetically defined)系列培養(yǎng)基屬于Minimal medium,也可以稱為不*培養(yǎng)基。Minimal SD Base由硫酸銨、微量元素、葡萄糖按比例混合而成,可以提供野生型酵母菌維持生存所需的基本物質(zhì),但不包含突變菌株的氨基酸。Minimal SD Agar Base在前者基礎(chǔ)上加入Agar。Minimal SD Base Gal/Raf由硫酸銨、微量元素、半乳糖及棉子糖混合而成;Minimal SD Base Gal由硫酸銨、微量元素、半乳糖混合而成;Minimal SD Base Raf 由硫酸銨、微量元素、棉子糖混合而成,對應的固體培養(yǎng)基均在其基礎(chǔ)上加入Agar。

 

Minimal Liquid Media with Glucose (Broth)

 

1. 1 L去離子水中加入相應量的Minimal SD BaseDropout Supplements(缺陷型氨基酸混合物),攪拌溶解。

2. 調(diào)節(jié)pH 5.8。121℃高壓15分鐘。

3. 4℃冰箱避光儲存已經(jīng)的液體培養(yǎng)基。

 酵母單雜交(Yeast one-hybrid)是根據(jù)DNA結(jié)合蛋白(即轉(zhuǎn)錄因子)與DNA順式作用元件結(jié)合調(diào)控報告基因表達的原理,克隆與靶元件結(jié)合的轉(zhuǎn)錄因子基因(cDNA)的方法。其理論基礎(chǔ)是:許多真核生物的轉(zhuǎn)錄子由物理和功能上的DNA結(jié)合區(qū)(DNA-binding domain BD)和轉(zhuǎn)錄區(qū)(Activation domain AD)組成,因此可構(gòu)建基因與AD的融合表達載體,在酵母中表達為融合蛋白時,根據(jù)報道基因的表達情況,便能篩選出與靶元件有結(jié)合區(qū)域的蛋白。理論上,在單雜交檢測中,靶元件都可被用于篩選一種與之有結(jié)合區(qū)域的蛋白。

雙雜交系統(tǒng)的建立得力于對真核生物調(diào)控轉(zhuǎn)錄起始過程的認識。細胞起始基因轉(zhuǎn)錄需要有反式轉(zhuǎn)錄因子的參與。80年代的工作表明, 轉(zhuǎn)錄因子在結(jié)構(gòu)上是組件式的(modular), 即這些因子往往由兩個或兩個以上相互的結(jié)構(gòu)域構(gòu)成,其中有DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域(DNA binding domain,簡稱為BD)和轉(zhuǎn)錄結(jié)構(gòu)域(activation domain,簡稱為AD),它們是轉(zhuǎn)錄因子發(fā)揮功能所的。單獨的BD雖然能和啟動子結(jié)合,但是不能轉(zhuǎn)錄。而不同轉(zhuǎn)錄因子的BD和AD形成的雜合蛋白仍然具有正常的轉(zhuǎn)錄的功能。如酵母細胞的Gal4蛋白的BD與大腸桿菌的一個酸性結(jié)構(gòu)域B42融合得到的雜合蛋白仍然可結(jié)合到Gal4結(jié)合位點并轉(zhuǎn)錄。

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SD/-Ade/-His/-Leu/-Met/-Trp Broth10×0.5L
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SD/-Ade/-His/-Leu/-Trp Broth10×0.5L
SD/-Ade/-His/-Leu/-Trp/-Ura Broth10×0.5L
  

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