冷凍保存細胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

產品屬性：

名稱    小鼠嗅鞘細胞
2.組織來源：嗅球組織

3.產品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶

4.細胞簡介：

小鼠嗅鞘細胞分離自嗅球組織；嗅鞘細胞（OECs）是在功能上介于施旺細胞和少突膠質細胞之間的一種特殊的膠質細胞，具有神經營養(yǎng)、抑制膠質增生、瘢痕形成、成鞘作用等；為軸突生長提供了適宜的微環(huán)境及較強的遷移的特性，使其成為促進中樞神經再生的理想候選細胞之一。嗅鞘細胞是目前所發(fā)現的極少數的中樞神經系統(tǒng)可以再生細胞之一，其特點為終身具有神經再生功能，還能夠釋放多種神經營養(yǎng)因子、神經粘附分子。被認為是髓鞘化能力強的膠質細胞，逐漸用于治療脊髓損傷。嗅鞘細胞與膠質細胞、雪旺細胞在表現型上有共同點，它們都能促進軸突的再生，主要區(qū)別在于嗅鞘細胞不但存在于中樞神經系統(tǒng)，也存在于外周神經中。嗅鞘細胞被認為是一種可塑性很高的細胞，它可表現出多種細胞形態(tài)和細胞表面標志，在嗅系統(tǒng)發(fā)育過程中，嗅鞘細胞根據其在組織定位的不同而有不同的抗原表型，其中P75NTR、GFAP、和O4可標記大部分在體嗅鞘細胞，然而在嗅球外神經層O4陽性嗅鞘細胞仍然可以在P75NTR陽性細胞層內分化成E-NCAM陽性的細胞層，還有一定比率的嗅鞘細胞P75NTR陰性而NY和S100表型為陽性。嗅黏膜中的神經元是生后才生長并在成年時繼續(xù)分化的神經元，壽命為4-12周，隨著新細胞的生長，又建立了新的神經支配關系。嗅鞘細胞存在于嗅神經及嗅球的神經層上，沿嗅神經的全長，從周圍神經系統(tǒng)到中樞神經分布。

5.方法簡介：

公司實驗室分離的小鼠嗅鞘細胞采用-膠原酶聯合消化法、結合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

6.質量檢測：

公司實驗室分離的小鼠嗅鞘細胞經GFAP免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

7.培養(yǎng)信息：

包被條件 PLL（0.1mg/ml）

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 神經元細胞樣

傳代特性 屬于終末分化細胞；屬于不增殖細胞群

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

培養(yǎng)操作：
1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或將 細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數板計數。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞，根據細胞數量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液，注意凍 存管做好標識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
路德類酵母   黃綠綠僵菌

黑曲霉菌凍干粉   棒曲霉

類芽孢桿菌   貝形側耳、鷹翅菌

陰溝腸桿菌（陰溝腸桿菌陰溝亞種）   缺陷短波單胞菌

大禿馬勃   長根菇
大鼠晚期糖基化端產物特異受體(AGER)elisa檢測試劑盒

大鼠蛙皮素,雨蛙肽elisa檢測試劑盒

大鼠脫氧膠原吡啶交聯(DPD)elisa檢測試劑盒

大鼠脫氫表雄酮硫酸酯(DHEA-S)elisa檢測試劑盒免費代測

大鼠脫氫表雄酮(DHEA)elisa檢測試劑盒
小鼠嗅鞘細胞人補體1抑制物抗體-IgG(C1INH-IgG)elisa檢測試劑盒

人補體1抑制物抗體-IgM(C1INH-IgM)elisa分析檢測試劑盒

人補體1抑制物抗體-IgM(C1INH-IgM)elisa檢測試劑盒免費代測

人補體3裂解產物(C3SP)elisa分析檢測試劑盒

人補體3裂解產物(C3SP)elisa檢測試劑盒
實驗報告：
產品僅用于科研一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，后將成1mm3左右大??；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。