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當(dāng)前位置:上海研生實業(yè)有限公司>>天然蛋白、重組蛋白>>重組蛋白/RP>> 鈣蛋白酶5(CAPN5)重組蛋白
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所 在 地上海市
更新時間:2023-03-22 15:24:36瀏覽次數(shù):342次
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主要用途 | 僅供科研實驗 | 英文名稱 | Recombinant Calpain 5 (CAPN5) |
種屬 | Homo sapiens (Human,人) | 規(guī)格 | 10μg50μg200μg1mg5mg |
品牌 | 研生 |
公司產(chǎn)品僅供科研使用,不得用于臨床!
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 物種 |
鈣蛋白酶5(CAPN5)重組蛋白 | Recombinant Calpain 5 (CAPN5) | Homo sapiens (Human,人) |
商品介紹:
HTRA3; nCL3; Calpain htra-3; New calpain 3 酶與激酶 物種:Homo sapiens (Human,人) 來源:原核表達(dá) 宿主E.coli 內(nèi)毒素水平:<1.0EU/μg(LAL法測定) 亞細(xì)胞定位::n/a 預(yù)測分子量:69.4kDa 實際分子量:70kDa(差異分析請參閱說明書) 片段與標(biāo)簽:Phe2~Asn344 with N-terminal His and GST Tag 緩沖液成份:20mM Tris, 150mM NaCl緩沖液(pH8.0, 含有1mM EDTA, 1mM DTT, 0.01% SKL, 5% Trehalose和Proclin300) 性狀:凍干粉 純度:> 90% 等電點:5.8 應(yīng)用:Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB. 規(guī)格10μg50μg200μg1mg5mg |
蛋白表達(dá)及純化:
1.培養(yǎng)500ml哺乳動物細(xì)胞,然后將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到細(xì)胞中,通過瞬時表達(dá)產(chǎn)生目標(biāo)蛋白。
2.收集含有目標(biāo)蛋白的部分(細(xì)胞或培養(yǎng)上清)。
3.通過親和,離子交換,疏水及凝膠過濾等多種層析方法純化表達(dá)的重組蛋白。
4.通過SDS-PAGE電泳檢測每步結(jié)果并控制最終產(chǎn)品質(zhì)量。
5.通過Western-blot驗證目標(biāo)蛋白正確性。
相關(guān)產(chǎn)品:
糖合酶1(CHSY1)重組蛋白英文名稱:Recombinant Carbohydrate Synthase 1 (CHSY1)Mus musculus (Mouse,小鼠)
糖合酶3(CHSY3)重組蛋白英文名稱:Recombinant Carbohydrate Synthase 3 (CHSY3)Homo sapiens (Human,人)
糖核酸外切酶1(ERI1)重組蛋白英文名稱:Recombinant Exoribonuclease 1 (ERI1)Homo sapiens (Human,人)
糖磺基轉(zhuǎn)移酶9(CHST9)重組蛋白英文名稱:Recombinant Carbohydrate Sulfotransferase 9 (CHST9)Homo sapiens (Human,人)
注意事項:
1、不同細(xì)胞或組織樣品所需的固定時間有所不同,應(yīng)當(dāng)根據(jù)細(xì)胞或組織的種類以及組織塊的大小來調(diào)整固定時間。
2、雖然作用溫和,但能硬化組織,固定時間過久會導(dǎo)致組織變脆,切片時易碎。因此固定時間通常不宜超過 24 小時。
3、醛基與抗原蛋白的氨基交聯(lián)形成羧甲基,使抗原決定簇的三維構(gòu)象出現(xiàn)空間障礙。分子間交聯(lián)形成的網(wǎng)格結(jié)構(gòu)可能部分或 掩蓋某些抗原決定簇,使之不能充分暴露,可造成假陰性的染色,影響免疫組化結(jié)果。因此,4%固定的細(xì)胞或組織樣品在進(jìn)行免疫組化檢測時,有時需要對抗原先進(jìn)行修復(fù),然后才能進(jìn)行免疫染色等后續(xù)操作。
4、本產(chǎn)品對人體有害,操作時請小心,并注意有效防護(hù)以避免直接接觸人體或吸入體內(nèi)。
5、為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作
操作步驟:
Ⅰ 實體組織蛋白的提取
1. 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制劑, 1 μL蛋白酶抑制劑和 5μL 100mM PMSF,混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。
2. 每100mg固體組織置于培養(yǎng)皿中,剪碎成3mm×3mm左右的小塊,加入0.5~1 mL冷 Lysis Buffer,玻璃勻漿器上下手動勻漿15次,注意低溫操作;
3. 取組織勻漿液轉(zhuǎn)移到1.5mL預(yù)冷的離心管,離心10000轉(zhuǎn)/分,4℃離心5 min;
4. 取上清轉(zhuǎn)移至新的預(yù)冷的離心管中,即為全蛋白提取物,蛋白定量(Bradford法、BCA法);
5. 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融。
Ⅱ 培養(yǎng)細(xì)胞蛋白提取
1. 貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞,吸去培養(yǎng)基后,加入10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS洗兩次,每次振搖數(shù)次以盡量去除培養(yǎng)液;
2. 懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞或用細(xì)胞刮子刮下的貼壁細(xì)胞,將細(xì)胞及培養(yǎng)液移至離心管中, 1000轉(zhuǎn)/分離心10 min,再用10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS,1000轉(zhuǎn)/分離心5 min洗兩次;
3. 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制劑, 1μL蛋白酶抑制劑和5μL 100mM PMSF,混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。
4. 細(xì)胞洗滌后,轉(zhuǎn)至新的預(yù)冷的離心管中,加入上述配制好的冷Lysis Buffer,加入量如下表所示:
細(xì)胞數(shù)量 | Lysis Buffer加入量 |
107個 | 0.5 mL~1 mL |
5×106個 | 0.2 mL~0.5 mL |
5.置于4℃搖床平臺上,溫和振蕩15 min;
6. 14,000rpm,4℃離心15min,取上清為全蛋白提取物, 蛋白定量(Bradford法、BCA法);
7. 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融。
Cathelicidin產(chǎn)品名稱: 抗菌肽CAMP/LL-37抗菌蛋白抗體交叉反應(yīng): Human
Dnmt2產(chǎn)品名稱: DNA甲基轉(zhuǎn)移mei2抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Pig, Cow, Sheep
P2X3產(chǎn)品名稱: 三磷suan苷受體受體P2X3抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Pig, Horse, Rabbit
HAGHL產(chǎn)品名稱: 羥基酰水解mei樣蛋白抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Dog, Pig, Cow, Horse, Sheep
DAP13產(chǎn)品名稱: 細(xì)胞分化相關(guān)蛋白13抗體交叉反應(yīng): Human, Rat
IP3 receptor產(chǎn)品名稱: 5-三磷suan肌醇受體1抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Chicken, Dog, Cow, Horse, Rabbit
Artemin產(chǎn)品名稱: Artemin抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat
phospho-Tau (Ser515)產(chǎn)品名稱: 微管相關(guān)蛋白抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Dog, Horse, Rabbit
GEN1產(chǎn)品名稱: GEN1蛋白抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Pig, Cow, Horse, Sheep
ITSN1產(chǎn)品名稱: 交叉蛋白1抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Dog, Cow, Horse, Rabbit, Sheep
鈣蛋白酶5(CAPN5)重組蛋白人TAO激mei2(TAOK2)ELISA試劑盒TAOK2TAO激mei2elisa kitHuman TAO Kinase 2(TAOK2)ELISA Kit
人TAO激mei1(TAOK1)ELISA試劑盒TAOK1TAO激mei1ELISA試劑盒Human TAO Kinase 1(TAOK1)ELISA Kit
人TANK結(jié)合激mei1(TBK1)ELISA試劑盒TBK1TANK結(jié)合激mei1elisamei聯(lián)免疫試劑盒Human TANK Binding Kinase 1(TBK1)ELISA Kit
人Talpid人3蛋白(Talpid3)ELISA試劑盒Talpid3Talpid3蛋白elisa檢測試劑盒Human Talpid 3(Talpid3)ELISA Kit
人Talanin蛋白(TALN)ELISA試劑盒TALNTalanin蛋白elisa kitHuman Talanin(TALN)ELISA Kit
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