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蜂房小甲蟲PCR檢測試劑盒

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更新時(shí)間:2023-02-28 11:58:45瀏覽次數(shù):132

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產(chǎn)品簡介

供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 50T
應(yīng)用領(lǐng)域 化工 主要用途 僅供科研實(shí)驗(yàn)
英文名稱 Aethina tumidaPCR 規(guī)格 50T
蜂房小甲蟲PCR檢測試劑盒公司正在銷售的產(chǎn)品:博茲曼熒光桿菌PCR檢測試劑盒
緊密著色霉PCR檢測試劑盒
佩氏著色霉PCR檢測試劑盒
著色霉PCR檢測試劑盒

詳細(xì)介紹

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布魯塞爾德克酵母PCR檢測試劑盒

布魯氏桿菌屬通用PCR檢測試劑盒

布魯氏菌PCR試劑盒

布魯氏菌核酸熒光PCR檢測試劑盒(探針法)
操作流程
收集基因信息——>設(shè)計(jì)引物——>PCR ——>回收目的片段——>與載體連接,取得連接產(chǎn)物 ——> 用感受態(tài)細(xì)胞做轉(zhuǎn)化 ——>接菌——>陽性克隆(酶切法或PCR)——>質(zhì)粒抽提——>質(zhì)粒測序——>測序結(jié)果分析——>克隆信息輸入數(shù)據(jù)庫——>質(zhì)粒實(shí)物保存。4.png

產(chǎn)品名稱

英文名稱

規(guī)格

蜂房小甲蟲PCR檢測試劑盒

Aethina tumidaPCR

50T

PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1
:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl     dNTP mix
2mM
4 μl    
引物110pM
2 μl    
引物210pM
2 μl     Taq
酶 (2U/μl
1 μl     DNA
模板(50ng-1μg/μl
1 μl      
ddH2O 50 μl
PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2
:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93
預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93 40s → 58 30s → 72 60s,循環(huán)30-35次,在727min。
3
:伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4
待電泳檢測或-20長期保存。
4
PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。

實(shí)時(shí)熒光定量PCR
實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點(diǎn)檢測的局限,實(shí)現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強(qiáng)度,并記錄在電腦軟件之中,通過對每個(gè)樣品Ct值的計(jì)算,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得定量結(jié)果。因此,實(shí)時(shí)熒光定量PCR無需內(nèi)標(biāo)是建立在兩個(gè)基礎(chǔ)之上的:
1
Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達(dá)Ct值所在的循環(huán)數(shù)時(shí),剛剛進(jìn)入真正的指數(shù)擴(kuò)增期(對數(shù)期),此時(shí)微小誤差尚未放大,因此Ct值的重現(xiàn)性,即同一模板不同時(shí)間擴(kuò)增或同一時(shí)間不同管內(nèi)擴(kuò)增,得到的Ct值是恒定的。
2
Ct值與起始模板的線性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關(guān)系,可利用標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知樣品進(jìn)行定量測定,因此,實(shí)時(shí)熒光定量PCR是一種采用外標(biāo)準(zhǔn)曲線定量的方法。
外標(biāo)準(zhǔn)曲線的定量方法相比內(nèi)標(biāo)法是一種準(zhǔn)確的、值得信賴的科學(xué)方法。利用外標(biāo)準(zhǔn)曲線的實(shí)時(shí)熒光定量PCR是迄今為止定量最準(zhǔn)確,重現(xiàn)性定量方法,已得到,廣泛用于基因表達(dá)研究、轉(zhuǎn)基因研究,藥物療效考核、病原體檢測等諸多領(lǐng)域。
定量PCR方法:
a、競爭法
選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個(gè)新內(nèi)切位點(diǎn)的外源競爭性模板。在同一反應(yīng)管中,待測樣品與競爭模板用同一對引物同時(shí)擴(kuò)增(其中一個(gè)引物為熒光標(biāo)記)。擴(kuò)增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物,競爭性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個(gè)片段,而待測模板不被酶切,可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開,分別測定熒光強(qiáng)度,根據(jù)已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù)。
b
、內(nèi)參照法
在不同的PCR反應(yīng)管中加入已定量的內(nèi)標(biāo)和引物,內(nèi)標(biāo)用基因工程方法合成。上游引物用熒光標(biāo)記,下游引物不標(biāo)記。在模板擴(kuò)增的同時(shí),內(nèi)標(biāo)也被擴(kuò)增。在PCR產(chǎn)物中,由于內(nèi)標(biāo)與靶模板的長度不同,二者的擴(kuò)增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來,分別測定其熒光強(qiáng)度,以內(nèi)標(biāo)為對照定量待檢測模板。
c
、PCRELISA
利用di高辛等標(biāo)記引物,擴(kuò)增產(chǎn)物被固相板上特異的探針?biāo)Y(jié)合,再加入抗di高辛酶標(biāo)抗體-辣根過氧化物酶結(jié)合物,最終酶使底物顯色。常規(guī)的PCRELISA法只是定性實(shí)驗(yàn),若加入內(nèi)標(biāo),作出標(biāo)準(zhǔn)曲線,也可實(shí)現(xiàn)定量檢測目的。

操作流程:
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4。
2.
設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL;
3.
樣本孔中加入待測樣本50μL;空白孔不加。
4.
除空白孔外,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37
水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.
棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機(jī)洗板)。
6.
每孔加入底物A、B50μL,37
避光孵育15min產(chǎn)品僅用于科研實(shí)驗(yàn)
7.
每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長處測定各孔的OD值。

下列是公司正在銷售的產(chǎn)品:
143TK細(xì)胞,胸腺激酶缺陷性細(xì)胞系 鼠傷Ta100 大鼠腎小球系膜細(xì)胞;HBZY-13,5--L-3,5-Diiodo-L-tyrosine質(zhì)量規(guī)格:BR,98%

CX3CL1 Protein Canine 重組狗 Fractalkine / CX3CL1 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)L-脯甲酯鹽酸鹽L-Proline methyl ester 質(zhì)量規(guī)格:>98.5%,BR

MG-63(骨肉瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠 CD320 / 8D6A 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) L-絲甲酯鹽酸鹽L-Serine methyl ester 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR

犬胸腺細(xì)胞;cf2ThL-色甲酯鹽酸鹽L-Tryptophan methyl ester 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR

前列腺平滑肌細(xì)胞(HPSMC)(5×105)L-酪甲酯L-Tyrosine methyl ester 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR

滑膜細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105(1ml)維生素C鈉(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:含量測定 ascorbate

骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(hMSCs) 肝癌細(xì)胞,Hep G2細(xì)胞 C127(細(xì)胞)標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:含量測定Thiamine nitrate

癌細(xì)胞;MDA-MB-157α-,細(xì)辛(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:HPLC99%,標(biāo)準(zhǔn)品alpha-Asarone

BMPR1A Others Mouse 小鼠 ALK-3 / BMPR1A 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:鑒別Dioxopromethazine

中國倉鼠卵巢細(xì)胞(亞系克隆);CHO-HCV-E1特比萘芬-d7鹽酸鹽質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口Terbinafine-d7
蜂房小甲蟲PCR檢測試劑盒1175954-87-6  Arachidonoyl m-Nitroaniline  50mg  Mycobacterium avian禽結(jié)核分枝桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒 

1175954-87-6  Arachidonoyl m-Nitroaniline  5mg  Mycobacterium avium鳥分枝桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒 

117609-50-4  Tauroursodeoxycholate dihydrate  10mM*1mLinDMSO  Mycobacterium asiaticum亞洲分枝桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒 

117609-50-4  Tauroursodeoxycholate dihydrate  50mg  Mycobacterium avian禽結(jié)核分枝桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒 

117620-76-5  H-Pro-Thr-His-Ile-Lys-Trp-Gly-Asp-OH  100mg  Mycobacterium abscessus complex膿腫分枝桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒

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