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利用高效液相色譜檢測抗菌素—蟲草素的相關(guān)案例
蟲草素又被稱為蟲草菌素、蛹蟲草菌素，是第一個從真菌中分離出的核苷類抗菌素。20世紀50年代，野生蛹蟲草在吉林長白山一帶被發(fā)現(xiàn)，研究證實其成分功效遠超野生冬蟲夏草，故而命名北冬蟲夏草；1951年，德國科學家等發(fā)現(xiàn)蛹蟲草核心成分“蟲草素"，發(fā)現(xiàn)其具有多種藥理活性，至今蟲草素在新藥研制、保健等多領域備受關(guān)注。
蟲草素的檢測方法以高效液相色譜為主，包括正相、反相、質(zhì)譜聯(lián)用等，還有毛細管電泳法等。微源檢測經(jīng)查閱文獻分享一種利用高效液相色譜法（HPLC）測定冬蟲夏草中蟲草素含量的檢測方法。
方法選擇合適色譜柱，流動相A為水，流動相B為乙腈，梯度洗脫0～3min，檢測波長260nm，柱溫35℃，進樣量10μL。以保留時間定性，峰面積定量，計算蟲草素含量。精密量取蟲草素對照品4.76mg，置入10mL量瓶，加水適量，使溶解，用水稀釋至刻度，制成濃度為0.476mg／mL的對照品貯備液，取貯備液1.0mL，置入10mL量瓶，加水定容至10mL，得濃度47.6μg／mL的蟲草素對照品溶液。
準確稱取冬蟲夏草1g，用1％乙酸溶液浸泡過夜，37℃超聲提取30min，過濾，收集濾液并用1％乙酸溶液定容至10mL。取2mL，加入乙腈2mL，沉淀蛋白，離心，取上清凍干，加水1mL溶解，0.45lam微孔濾膜濾過得到供試品溶液，待測。
供試品溶液進樣測定，得到色譜峰。對線性關(guān)系精密度、重復性穩(wěn)定性依次進行檢測。以進樣濃度為橫坐標(x)，峰面積為縱坐標(y)，繪制標準曲線，得回歸方程和相關(guān)系數(shù)得到在范圍內(nèi)的濃度與峰面積呈良好線性關(guān)系，計算蟲草素的峰面積RSD表明實驗的精密度良好穩(wěn)定性質(zhì)良好。
準確稱取已知蟲草素含量的冬蟲夏草樣品6份，分別精密加入47.6μg／mL的蟲草素對照品溶液0.5mL，將供試品溶液，按調(diào)試好的色譜條件測定，計算回收率。取冬蟲夏草藥材，將供試品溶液，按調(diào)試好的色譜條件測定。得到不同產(chǎn)地冬蟲夏草蟲草素的含量。
利用蟲草素的理化性質(zhì)，方法選用乙腈-水作為流動相系統(tǒng)，梯度洗脫分離蟲草素，可以將蟲草素與雜質(zhì)進行很好的分離，色譜峰的對稱度和分離度較好，峰形窄且對稱。高效液相色譜技術(shù)不斷發(fā)展成熟，相關(guān)的檢測研究日漸增多。實驗室遵照ISO17025和GMP進行實驗室管理，專注為藥品生產(chǎn)過程中可能產(chǎn)生的雜質(zhì)提供評估報告、方法開發(fā)、驗證及樣品檢測等一系列完整的解決方案。更多檢測問題歡迎私信及評論區(qū)留言！
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