LMT光度計P30SCO

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分光光度法是在特定波長處或一定波長范圍內(nèi)光的吸收度，對該物質(zhì)進行定性或定量分析。常用的波長范圍為：(1)200～380nm的紫外光區(qū)，(2)380～780nm的可見光區(qū)，(3)2.5～25μm（按波數(shù)計為4000cm<-1>～400cm<-1>）的紅外光區(qū)。所用儀器為紫外分光光度計、可見光分光光度計（或比色計）、紅外分光光度計或原子吸收分光光度計。為保證測量的精密度和準確度，所有儀器

儀器組成

分光光度計已經(jīng)成為現(xiàn)代分子生物實驗室常規(guī)儀器。常用于核酸，蛋白定量以及細菌生長濃度的定量。

儀器主要由光源、單色器、樣品室、檢測器、信號處理器和顯示與存儲系統(tǒng)組成。

光譜范圍

包括波長范圍為400~760 nm的可見光區(qū)和波長范圍為200～400 nm的紫外光區(qū)。不同的光源都有其*的發(fā)射光譜,因此可采用不同的發(fā)光體作為儀器的光源。

鎢燈的發(fā)射光譜:鎢燈光源所發(fā)出的400～760nm波長的光譜光通過三棱鏡折射后,可得到由紅橙，黃綠，藍靛，紫組成的連續(xù)色譜;該色譜可作為可見光分光光度計的光源。

分光光度計圖片(4張)

氫燈（或氘燈）的發(fā)射光譜:氫燈能發(fā)出185～400 nm波長的光譜可作為紫外光光度計的光源。

物質(zhì)的吸收光譜：

如果在光源和棱鏡之間放上某種物質(zhì)的溶液,此時在屏上所顯示的光譜已不再是光源的光譜，它出現(xiàn)了幾條暗線,即光源發(fā)射光譜中某些波長的光因溶液吸收而消失，這種被溶液吸收后的光譜稱為該溶液的吸收光譜。

不同物質(zhì)的吸收光譜是不同的.因此根據(jù)吸收光譜,可以鑒別溶液中所含的物質(zhì)。

當(dāng)光線通過某種物質(zhì)的溶液時透過的光的強度減弱，因為有一部分光在溶液的表面反射或分散，一部分光被組成此溶液的物質(zhì)所吸收只有一部分光可透過溶液。

入射光= 反射光 + 分散光 + 吸收光 + 透過光。

如果我們用蒸餾水(或組成此溶液的溶劑)作為"空白"去校正反射，分散等因素造成的入射光的損失則：

入射光 = 吸收光 十 透過光

分光光度計采用一個可以產(chǎn)生多個波長的光源，通過系列分光裝置，從而產(chǎn)生特定波長的光源，光線透過測試的樣品后，部分光線被吸收，計算樣品的吸光值，從而轉(zhuǎn)化成樣品的濃度。樣品的吸光值與樣品的濃度成正比。

單色光輻射穿過被測物質(zhì)溶液時，被該物質(zhì)吸收的量與該物質(zhì)的濃度和液層的厚度（光路長度）成正比，其關(guān)系如下式：

A=-lg(I/I0)=-lgT=kLc

式中 :A 為吸光度；

I0為入射的單色光強度；

I 為透射的單色光強度；

T 為物質(zhì)的透射率；

k 為摩爾吸收系數(shù)；

L 為被分析物質(zhì)的光程，即比色皿的邊長；

c 為物質(zhì)的濃度；

物質(zhì)對光的選擇性吸收波長，以及相應(yīng)的吸收系數(shù)是該物質(zhì)的物理常數(shù)。當(dāng)已知某純物質(zhì)在一定條件下的吸收系數(shù)后可用同樣條件將該供試品配成溶液，測定其吸收度,即可由上式計算出供試品中該物質(zhì)的含量。在可見光區(qū)，除某些物質(zhì)對光有吸收外，很多物質(zhì)本身并沒有吸收但可在一定條件下加入顯色試劑或經(jīng)過處理使其顯色后再測定,故又稱比色分析。由于顯色時影響呈色深淺的因素較多，且常使用單色光純度較差的儀器，故測定時應(yīng)用標準品或?qū)φ掌吠瑫r操作。

儀器特點

　　*的雙光路、雙光束光學(xué)系統(tǒng)，儀器分辨率更高，雜散光更低，穩(wěn)定性、可靠性更強，分析更加準確；
　　采用320*240位點陣式高亮6 ”液晶顯示器，顯示清晰，信息完備；
　　*的長光程光路設(shè)計，使儀器分辨率更高，尤其適合微量測試 強大的數(shù)據(jù)處理功能，使測試結(jié)果能得到充分的應(yīng)用，用戶編輯更為簡單快捷；
　　采用懸架式光學(xué)系統(tǒng)設(shè)計，整體光路獨立固定在16mm厚的鋁制無變形基座上，底板的變形和外界的震動對光學(xué)系統(tǒng)不產(chǎn)生任何影響，從而大大提高了儀器的穩(wěn)定性和可靠性；
　　采用同步正弦機構(gòu)，波長準確度高，重復(fù)性好；
　　采用ARM系統(tǒng)；
　　0.1/0.2/0.5/1.0/2.0/4.0六檔光譜帶寬自動可選，滿足不同用戶的測量需求；
　　24位高速、高精度A/D轉(zhuǎn)換，儀器精度更高、反應(yīng)速度更快；
　　主要元件采用進口配置，使儀器雜散光更低、穩(wěn)定性、可靠性更強；
　　功能更加強大，主機可獨立完成光度測量、定量測量、光譜掃描、動力學(xué)、DNA/蛋白質(zhì)測試，多波長測試及數(shù)據(jù)打印等功能；
　　充分考慮不同用戶的使用習(xí)慣，本系列儀器都標配元析公司光譜掃描軟件，聯(lián)機操作時，除能實現(xiàn)主機的所有測試功能外，還可實現(xiàn)更為強大的數(shù)據(jù)處理功能，并且使數(shù)據(jù)存儲達到無限。

儀器指標

型號UV-9000波長范圍190-900nm；光譜帶寬0.1/0.2/0.5/1.0/2.0/4.0nm六檔可選波長，準確度±0.1nm（D2 656.1nm）、 ±0.3nm；全區(qū)域波長重復(fù)性≤0.1nm。

光度準確度：±0.2%T

光度重復(fù)性：≤0.1%T

雜散光：≤0.01%T

穩(wěn)定性：±0.0004A/h（500nm處）

基線平直度：±0.001A

噪聲水平： ±0.0004A/h

光度范圍：0-200%T

電源：AC 220V/50Hz或110V/60Hz

重量：30kg

技術(shù)參數(shù)：

波長范圍：320∽1000nm

光譜帶寬：4nm

雜散光：≤0.5%（在360nm處）

波長準確度：優(yōu)于±2nm

透射比準確度：≤±1nmT

常見用途

核酸的定量

核酸的定量是分光光度計使用頻率功能?？梢远咳苡诰彌_液的寡核苷酸，單鏈、雙鏈DNA，以及RNA。核酸的吸收峰的吸收波長260 nm。每種核酸的分子構(gòu)成不一，因此其換算系數(shù)不同。定量不同類型的核酸，事先要選擇對應(yīng)的系數(shù)。如：1OD 的吸光值分別相當(dāng)于50μg/ml的dsDNA，37μg/ml的ssDNA，40μg/ml的RNA，30μg/ml的Olig。測試后的吸光值經(jīng)過上述系數(shù)的換算，從而得出相應(yīng)的樣品濃度。測試前，選擇正確的程序，輸入原液和稀釋液的體積，爾后測試空白液和樣品液。然而，實驗并非一帆風(fēng)順。讀數(shù)不穩(wěn)定可能是實驗者頭痛的問題。靈敏度越高的儀器，表現(xiàn)出的吸光值漂移越大。

事實上，分光光度計的設(shè)計原理和工作原理，允許吸光值在一定范圍內(nèi)變化，即儀器有一定的準確度和精確度。如Eppendorf Biophotometer的準確度≤1.0%（1A）。這樣多次測試的結(jié)果在均值1.0%左右之間變動，都是正常的。另外，還需考慮核酸本身物化性質(zhì)和溶解核酸的緩沖液的pH值，離子濃度等：在測試時，離子濃度太高，也會導(dǎo)致讀數(shù)漂移如TE，可大大穩(wěn)定讀數(shù)。樣品的稀釋濃度同樣是不可忽視的因素：由于樣品中不可避免存在一些細小的顆粒，尤其是核酸樣品。這些小顆粒的存在干擾測試效果。為了減少顆粒對測試結(jié)果的影響，要求核酸吸光值至少大于0.1A，吸光值在0.1-1.5A。在此范圍內(nèi)混合液不能存在氣泡，空白液無懸浮物，否則讀數(shù)漂移劇烈；必須使用相同的比色杯測試空白液和樣品，否則濃度差異太大；換算系數(shù)和樣品濃度單位選擇*；不能采用窗口磨損的比色杯；樣品的體積必須達到比色杯要求的小體積等多個操作事項。

除了核酸濃度，分光光度計同時顯示幾個非常重要的比值表示樣品的純度，如A260/A280的比值，用于評估樣品的純度，因為蛋白的吸收峰是280nm。純凈的樣品，比值大于1.8（DNA）或者2.0（RNA）。如果比值低于1.8 或者2.0，表示存在蛋白質(zhì)或者酚類物質(zhì)的影響。A230表示樣品中存在一些污染物，如碳水化合物，多肽，苯酚等，較純凈的核酸A260/A230的比值大于2.0。A320檢測溶液的混濁度和其他干擾因子。純樣品，A320一般是0