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GES-1-GES-1人胃黏膜上皮細(xì)胞
  • GES-1-GES-1人胃黏膜上皮細(xì)胞

貨物所在地:上海上海市

地: 上海市徐匯區(qū)聚科生物園銀都路4

更新時間:2024-12-20 16:08:39

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細(xì)胞描述

該細(xì)胞是從9個月的胎兒胃上皮細(xì)胞中培養(yǎng)分離出來,經(jīng)過SV40病毒轉(zhuǎn)染后,篩選獲得。不能在裸鼠中成瘤,是在研究人胃腫瘤過程中一種重要的模式系統(tǒng)。

細(xì)胞描述

該細(xì)胞是從9個月的胎兒胃上皮細(xì)胞中培養(yǎng)分離出來,經(jīng)過SV40病毒轉(zhuǎn)染后,篩選獲得。不能在裸鼠中成瘤,是在研究人胃腫瘤過程中一種重要的模式系統(tǒng)。

細(xì)胞特性

1) 來源:胃

2) 形態(tài):上皮樣,貼壁細(xì)胞

3) 含量:>1x106 個/mL

4) 污染:支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測為陰性

5) 規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝


運輸和保存

可選擇干冰運輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細(xì)胞方式:

(1)干冰運輸,收到后立即轉(zhuǎn)入液氮或者-80度冰箱凍存或直接復(fù)蘇;

(2)存活細(xì)胞,收到后應(yīng)繼續(xù)生長,傳代達(dá)到細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,再進(jìn)行凍存。具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟。

(3)收到細(xì)胞后請拍照,3天內(nèi)如果發(fā)現(xiàn)污染,請及時拍照與我們聯(lián)系。

細(xì)胞用途:僅供科研使用。


細(xì)胞接收后的處理:

1) 收到細(xì)胞后,請檢查是否漏液,如果漏液,請拍照片發(fā)給我們。

2) 請先在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長狀態(tài),酒精消毒瓶壁并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。

3) 將T25瓶中的細(xì)胞培養(yǎng)基離心后,去上清,添加6ml*培養(yǎng)基,加入新的T25瓶中繼續(xù)培養(yǎng)。

4) 如果細(xì)胞長滿80%請及時進(jìn)行細(xì)胞傳代.


細(xì)胞培養(yǎng)步驟

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:

1) 準(zhǔn)備DMEM培養(yǎng)基;北美胎牛血清,10%;2 mM glutamine(谷an酰胺);1 mM pyruvate(丙酮酸鹽); 50 μM 2-mercaptoethanol(巰基乙醇);雙抗,1%。

2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3) 凍存細(xì)胞:凍存細(xì)胞時,用FBS重懸細(xì)胞,然后加入一定量的DMSO,輕輕混合均勻后移入到凍存管中,DMSO終濃度為10%。

二. 細(xì)胞處理:

1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,離心管加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在800-1000RPM條件下離心4-5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng),補加培養(yǎng)基至6ml。

2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:

1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml此細(xì)胞的培養(yǎng)基終止消化。

3. 輕輕吹打后吸出,移入15ml離心管中,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)液后吹勻。

4 . 收到細(xì)胞后*傳代推薦將細(xì)胞懸液按1:2的比例分到新的含6ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,建議凍存一支備用,后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2到1:4的比例進(jìn)行。

3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,可進(jìn)行細(xì)胞凍存。

下面T25瓶為類;

1,細(xì)胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗一遍后加入1-2mlyi酶(含EDTA),細(xì)胞變圓脫落后,加入2-3ml含血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數(shù)板計數(shù)。

2,4min 1000rpm 離心去掉上清。加1ml血清重懸細(xì)胞,根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入血清和等體積的凍存液,輕輕混勻,DMSO終濃度為10%,細(xì)胞密度不低于1x10E6/ml,每支凍存管凍存1ml細(xì)胞懸液,注意凍存管做好標(biāo)識。

3,將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。



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