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THP-1 人單核細(xì)胞白血病細(xì)胞/STR鑒定/鏡像綺點(diǎn)（iCell）介紹

該細(xì)胞對(duì)乳汁珠和激活的紅細(xì)胞有吞噬作用，無(wú)表面和胞質(zhì)免疫球蛋白?？梢杂梅鸩ù?TPA誘導(dǎo)單核細(xì)胞分化。
 
細(xì)胞特性
1） 來(lái)源：急性單核細(xì)胞白血病，單核細(xì)胞
2） 形態(tài)：?jiǎn)魏思?xì)胞，懸浮
3） 含量：>1x106 個(gè)/mL
4） 污染：支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測(cè)為陰性
5） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

運(yùn)輸和保存

可選擇干冰運(yùn)輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細(xì)胞方式：

（1）干冰運(yùn)輸，收到后立即轉(zhuǎn)入液氮或者-80度冰箱凍存或直接復(fù)蘇；

（2）存活細(xì)胞，收到后應(yīng)繼續(xù)生長(zhǎng)，傳代達(dá)到細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，再進(jìn)行凍存。具體操作見(jiàn)細(xì)胞培養(yǎng)步驟。

（3）收到細(xì)胞后請(qǐng)拍照，3天內(nèi)如果發(fā)現(xiàn)污染，請(qǐng)及時(shí)拍照與我們聯(lián)系。

 THP-1 人單核細(xì)胞白血病細(xì)胞/STR鑒定/鏡像綺點(diǎn)（iCell）

細(xì)胞用途：僅供科研使用。

細(xì)胞接收后的處理：
1） 收到細(xì)胞后，請(qǐng)檢查是否漏液，如果漏液，請(qǐng)拍照片發(fā)給我們。
2） 請(qǐng)先在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)，酒精消毒瓶壁并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。
3） 貼壁細(xì)胞：將T25瓶中的細(xì)胞培養(yǎng)基離心后，去上清，添加6ml*培養(yǎng)基，加入新的T25瓶中繼續(xù)培養(yǎng)。
      懸浮細(xì)胞：2-3小時(shí)
4) 如果細(xì)胞長(zhǎng)滿(mǎn)80%請(qǐng)及時(shí)進(jìn)行細(xì)胞傳代.
 
細(xì)胞培養(yǎng)步驟
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1） 準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基；胎牛血清，10%；0.05 mM β－巰基乙醇(invitrogen 21985) 0.05mM；雙抗，1%。
2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3） 凍存液：*培養(yǎng)液95%，DMSO 5%（使用該凍存液后，按照我?guī)斓慕?jīng)驗(yàn)復(fù)蘇存活率約50%，復(fù)蘇后需要額外培養(yǎng)7-10天才能恢復(fù)生長(zhǎng)）
 
4） a) 該細(xì)胞為懸浮細(xì)胞，根據(jù)培養(yǎng)經(jīng)驗(yàn)以及客戶(hù)的反饋，傳代時(shí)使用【半換液法】對(duì)細(xì)胞狀態(tài)較為有利，因此我?guī)旖ㄗh您使用【半換液法】進(jìn)行傳代。同時(shí)，您在收到細(xì)胞后，請(qǐng)不要通過(guò)離心的方式收集細(xì)胞，可以直接向培養(yǎng)瓶中添加等體積的新鮮培養(yǎng)液，然后將細(xì)胞吹打均勻后移入兩個(gè)新的T25培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)即可。
b) 細(xì)胞對(duì)血清質(zhì)量較為敏感，我?guī)旖ㄗh您使用進(jìn)口*優(yōu)質(zhì)血清進(jìn)行培養(yǎng)。
c) 該細(xì)胞的培養(yǎng)液中需添加β-巰基乙醇（細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)別，可參考細(xì)胞說(shuō)明書(shū)中的品牌、貨號(hào)），若不添加，可能會(huì)對(duì)細(xì)胞狀態(tài)造成影響。
d) 該細(xì)胞對(duì)細(xì)胞密度較為敏感，培養(yǎng)、傳代時(shí)請(qǐng)注意保持細(xì)胞密度在合適的范圍（具體請(qǐng)參考細(xì)胞說(shuō)明書(shū)）。
e) 該細(xì)胞凍存后復(fù)蘇率較低，凍存時(shí)請(qǐng)酌情提高細(xì)胞量
二． 細(xì)胞處理：
1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入250px皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2） 參考傳代周期：傳代時(shí)控制細(xì)胞密度在20萬(wàn)-40萬(wàn)活細(xì)胞 / mL，并在細(xì)胞生長(zhǎng)至80萬(wàn)-100萬(wàn) cell / mL時(shí)進(jìn)行傳代
3） 參考傳代比例：傳代時(shí)控制細(xì)胞密度在20萬(wàn)-40萬(wàn)活細(xì)胞 / mL，并在細(xì)胞生長(zhǎng)至80萬(wàn)-100萬(wàn) cell / mL時(shí)進(jìn)行傳代。
4） 參考換液頻率：傳代時(shí)換液
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3） 細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。

下面T25瓶為例；  

1，細(xì)胞凍存時(shí)，取上清，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
2，4min ，1000rpm 離心去掉上清。加1ml血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入血清和DMSO，輕輕混勻，DMSO終濃度為5%，該細(xì)胞凍存后復(fù)蘇率較低，凍存時(shí)請(qǐng)酌情提高細(xì)胞量.每支凍存管凍存1ml細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。
3，將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少4個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

鏡像綺點(diǎn)（上海）細(xì)胞技術(shù)有限公司主要產(chǎn)品和服務(wù)介紹：

        一、原代細(xì)胞服務(wù)：
               各類(lèi)模式哺乳動(dòng)物的多種原代細(xì)胞資源
               多種人源性正常及腫瘤原代細(xì)胞資源
               原代細(xì)胞分離和培養(yǎng)相關(guān)試劑、kit、培養(yǎng)基添加劑等
               原代細(xì)胞相關(guān)技術(shù)服務(wù)及整體實(shí)驗(yàn)外包服務(wù)

        二、細(xì)胞系服務(wù)：
               細(xì)胞株/系培養(yǎng)、增殖、凍存和相關(guān)說(shuō)明書(shū)
               細(xì)胞系培養(yǎng)過(guò)程的技術(shù)指導(dǎo)
               細(xì)胞系培養(yǎng)基、添加劑、血清及相關(guān)生長(zhǎng)因子、試劑等

        三、iPS細(xì)胞服務(wù)：
               iPS細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)（有滋養(yǎng)層or無(wú)滋養(yǎng)層）
               iPS細(xì)胞增殖及冷凍保存
               iPS基礎(chǔ)培養(yǎng)技術(shù)實(shí)習(xí)
               新藥及實(shí)驗(yàn)儀器上市前評(píng)估

        四、其他技術(shù)外包服務(wù)、客戶(hù)定制服務(wù)等

鏡像綺點(diǎn)（上海）細(xì)胞技術(shù)有限公司