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RAW 264.7 小鼠單核巨噬細胞/鏡像綺點（iCell）介紹

此細胞株源自Abelson鼠科白血病病毒誘導的腫瘤。sIg-, Ia-抗原、Thy-1.2表面抗原陰性。此細胞株不分泌可檢測到的病毒顆粒，XC斑點形成試驗陰性?？梢园嬛行约t并吞噬乳膠顆粒與酵母聚糖?？梢钥贵w依賴性地分解綿羊紅血球與腫瘤靶細胞。LPS或PPD處理2天可誘導分解紅血球但對腫瘤靶細胞無作用。

細胞特性

1） 來源：鼠科白血病病毒誘導的腫瘤；單核細胞；巨噬細胞

2） 含量：>1x106 個/mL

3） 形態(tài)：不規(guī)則圓形，傳代時密度要大，易分化

4） 污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性

5） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

運輸和保存

可選擇干冰運輸及發(fā)送復蘇存活細胞方式

（1）干冰運輸，收到后立即轉(zhuǎn)入液氮凍存或直接復蘇；

（2）存活細胞，收到后應繼續(xù)生長，傳代達到細胞生長狀態(tài)良好時，再進行凍存。具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。

細胞用途：僅供科研使用。

細胞接受后的處理：

1） 收到細胞后，請檢查是否漏液，如果漏液，請拍照片發(fā)給我們。

2） 請先在顯微鏡下確認細胞生長狀態(tài)，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。

3） 棄去T25瓶中的培養(yǎng)基，添加6ml新的*培養(yǎng)基。

4） 如果細胞長滿（90%以上）請及時進行細胞傳代。

5） 接到細胞次日，請檢查細胞是否污染，若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染，請及時與我們?nèi)〉寐?lián)系。

細胞培養(yǎng)步驟

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

小鼠白血病病毒誘發(fā)腫瘤巨噬細胞RAW 264.7*培養(yǎng)液配方（100 ml）：

DMEM (Invitrogen, 11960-044) 88 ml

Glutamax（invitrogen 35050-061） 1 ml

Sodium Pyruvate （invitrogen 11360-070） 1 ml

FBS (Gibco) 10 ml

采購DMEM基礎(chǔ)培養(yǎng)基時要確認下培養(yǎng)基中谷氨酰胺、丙酮酸鈉是否添加，如果沒有添加，在培養(yǎng)細胞時技術(shù)人員要添加谷氨酰胺、丙酮酸鈉。

氣相：空氣95%，二氧化碳5%；37℃培養(yǎng)。

參考傳代周期：3-5天
參考傳代比例：1：3-1：6
參考換液頻率：2-3天

凍存液：90%血清，5~10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

RAW 264.7 小鼠單核巨噬細胞/鏡像綺點（iCell）培養(yǎng)時注意事項

(1) 該細胞傳代時不需要用胰酶消化。傳代時，吸走部分培養(yǎng)液，留下少許培養(yǎng)液（如T75培養(yǎng)瓶留下10ml），用無菌細胞刮刮拭培養(yǎng)表面將細胞刮落，吹打后接種到新的裝有新鮮培養(yǎng)液的培養(yǎng)瓶內(nèi)。

(2) 該株巨噬細胞形態(tài)上包含松散貼壁的紡錘形和圓形或者立方形的細胞。當細胞密度較大時，細胞會輕微脫落變圓或者許多細胞堆在一起，有些細胞甚至脫落漂浮，這些漂浮的細胞是存活的，在傳代時應收集起來離心，細胞沉淀可以繼續(xù)培養(yǎng)。

(3) 血清質(zhì)量差異可能引起細胞貼壁能力變化，應選用高質(zhì)量的胎牛血清。

二． 細胞處理：

1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?50px皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 用細胞刮鏟將細胞從培養(yǎng)瓶瓶壁上輕刮細胞使細胞脫落，將細胞懸液抽出到離心管內(nèi)。

3. 在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

注：*次傳代推薦傳代比例為1:2，以后傳代比例可根據(jù)客戶需要自己決定。

細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。

下面T25瓶為例；

1. 細胞凍存時，用細胞刮鏟將細胞從培養(yǎng)瓶瓶壁上輕刮細胞使細胞脫落，將細胞懸液抽出到離心管內(nèi)?？墒褂醚蛴嫈?shù)板計數(shù)。

2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用配好的凍存液重懸細胞， 注意DMSO終濃度為5~10%。按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X106個細胞凍存。

3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少4個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

鏡像綺點（上海）細胞技術(shù)有限公司主要產(chǎn)品和服務(wù)介紹：

        一、原代細胞服務(wù)：
               各類模式哺乳動物的多種原代細胞資源
               多種人源性正常及腫瘤原代細胞資源
               原代細胞分離和培養(yǎng)相關(guān)試劑、kit、培養(yǎng)基添加劑等
               原代細胞相關(guān)技術(shù)服務(wù)及整體實驗外包服務(wù)

        二、細胞系服務(wù)：
               細胞株/系培養(yǎng)、增殖、凍存和相關(guān)說明書
               細胞系培養(yǎng)過程的技術(shù)指導
               細胞系培養(yǎng)基、添加劑、血清及相關(guān)生長因子、試劑等

        三、iPS細胞服務(wù)：
               iPS細胞基礎(chǔ)培養(yǎng)（有滋養(yǎng)層or無滋養(yǎng)層）
               iPS細胞增殖及冷凍保存
               iPS基礎(chǔ)培養(yǎng)技術(shù)實習
               新藥及實驗儀器上市前評估

        四、其他技術(shù)外包服務(wù)、客戶定制服務(wù)等

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