核殼色譜柱的分離效率主要看哪些參數(shù)?
核殼色譜柱的分離效率主要看哪些參數(shù)?
核殼色譜柱是色譜儀分離試驗(yàn)中將多組分樣品分離為單個(gè)組分的儀器,它是色譜分離系統(tǒng)的核心。色譜柱分為填充柱和毛細(xì)管柱兩類(lèi),具有柱效高、選擇性好,分析速度快等特點(diǎn)。檢測(cè)色譜柱分離效率主要看三個(gè)參數(shù):理論塔板數(shù)、分辨率、峰形。
1.理論塔板數(shù)
用于定量表示色譜柱的分離效率參數(shù)之一(柱效)。柱效取決于固定相的種類(lèi)、色譜的柱效性質(zhì)(粒度、粒徑分布等)、填充狀況、柱長(zhǎng)、流動(dòng)相的種類(lèi)和流速及測(cè)定柱效所用物質(zhì)的性質(zhì)。塔板數(shù)是一個(gè)粗略的指標(biāo),不能作為評(píng)價(jià)色譜柱的標(biāo)準(zhǔn)。通常使用塔板數(shù)來(lái)考察色譜系統(tǒng):將新柱子接到儀器上,根據(jù)色譜柱生產(chǎn)商提供的測(cè)試條件測(cè)試該色譜柱,應(yīng)得到和分析報(bào)告上同樣的結(jié)果。差也應(yīng)該得到比報(bào)告值低10%的塔板數(shù)。如果所測(cè)塔板數(shù)遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于廠家提供的報(bào)告數(shù)據(jù),這就說(shuō)明你的色譜系統(tǒng)可能存在一些問(wèn)題。進(jìn)樣器、柱外效應(yīng)、毛細(xì)連接以及檢測(cè)器都是容易出現(xiàn)問(wèn)題的地方。
2.分辨率
這是考察色譜柱的一個(gè)非常重要的指標(biāo),只要兩個(gè)組分可以獲得基線分離,對(duì)該分析物的定量就不會(huì)有什么問(wèn)題。對(duì)于對(duì)稱(chēng)的高斯峰來(lái)講,1.5的分辨率即可得到基線分離;若Rs在1.7-2.0之間則更好。若峰拖尾嚴(yán)重則需要更高的分辨率。使用分辨率作為色譜柱的評(píng)價(jià)指標(biāo)的好處在于我們可以直觀地看到相鄰的峰的分離情況。
3.峰形
對(duì)于峰形拖尾情況,實(shí)際樣品中總是含有或多或少引起峰形拖尾的組分。值得一提的是含有氮原子的化合物,這些化合物和硅膠骨架上的游離硅羥基結(jié)合非常緊密,隨著色譜柱使用時(shí)間越長(zhǎng),鍵合相流失,拖尾則更加嚴(yán)重。然而拖尾情況的改變不像分辨率的改變那樣能夠馬上看出來(lái)。基于此,定一個(gè)拖尾因子的上限。
使用壓力、分辨率和峰形的混合指標(biāo)來(lái)考察一根色譜柱的狀態(tài)。壓力的測(cè)量是容易的,通常我們確定的色譜方法要滿足以下的要求:用新柱子時(shí)柱壓不高于2500psi,在任何情況下壓力都不超過(guò)3000psi。盡管現(xiàn)代液相色譜儀系統(tǒng)都可在更高的壓力下使用,但由于高壓產(chǎn)生的系統(tǒng)損耗和泄漏的問(wèn)題會(huì)很?chē)?yán)重。當(dāng)壓力超過(guò)3000psi時(shí),考慮更換進(jìn)樣器和色譜柱之間的0.5mm孔徑的在線濾片。如果更換濾片后壓力仍然高,則色譜柱的濾片或者是色譜柱已經(jīng)被污染,這提示我們?cè)摀Q柱子了。