免疫沉淀 (Immunoprecipitation，IP) 是利用抗原抗體特異性反應(yīng)純化富集目的蛋白的一種方法。抗體與細(xì)胞裂解液或表達(dá)上清中相應(yīng)的蛋白結(jié)合后，再與ProteinA/G偶聯(lián)的agarose或Sepharose珠子孵育，通過離心得到珠子-蛋白A/G-抗體-目的蛋白復(fù)合物，沉淀經(jīng)過洗滌后，重懸于電泳上樣緩沖液，煮沸5-10min，在高溫及還原劑的作用下，抗原與抗體解離，離心收集上清，上清中包括抗體、目的蛋白和少量的雜蛋白。
在免疫沉淀實(shí)驗(yàn)后的WB驗(yàn)證環(huán)節(jié)中，當(dāng)使用常規(guī)的 Anti-IgG (H+L) 酶標(biāo)二抗時(shí)，通常會(huì)出現(xiàn)對(duì)應(yīng)免疫沉淀一抗變性后產(chǎn)生的重鏈（50kDa）和輕鏈（25kDa）兩條帶。如果檢測(cè)的目的蛋白分子量在此附近時(shí)，就會(huì)受到這兩條帶的干擾。
 

如何避免IP檢測(cè)過程中的重、輕鏈干擾，兩種方案可供參考：
方案一：選擇WB一抗時(shí)，選擇和IP用一抗不同的種屬，避免IP一抗的干擾
山羊抗兔IgG二抗，HRP標(biāo)記，AMJ-AB2003

方案二：選擇只和重鏈或輕鏈反應(yīng)的二抗

IP™ 山羊抗小鼠IgG輕鏈二抗，HRP標(biāo)記，AMJ-AB2016
IP™ 山羊抗兔IgG重鏈二抗，HRP標(biāo)記，AMJ-AB2019
如果目標(biāo)蛋白分子量小于30KD，為了避免抗體輕鏈的干擾，選擇重鏈特異性二抗；如果目標(biāo)蛋白分子量大于30KD，為了避免抗體重鏈的干擾，選擇輕鏈特異性二抗。

IP實(shí)驗(yàn)常見問題匯總：