在進(jìn)行流式細(xì)胞儀多色分析時，如果想得到理想的分析結(jié)果，就需要選擇好抗體的熒光搭配。?？紤]的影響因素有以下幾點(diǎn)：

1.熒光素的熒光強(qiáng)度：

一個特定抗體，能否區(qū)分陰性與陽性結(jié)果，靠的是抗體上結(jié)合的熒光素標(biāo)記。每一種熒光素的光量子釋放能力不同，相對熒光強(qiáng)度不一樣，一般用染色指數(shù)（staining index）來比較不同熒光標(biāo)記的光信號強(qiáng)度。染色指數(shù)是陽性信號和陰性信號差異與陰性峰分布寬度比值，是判斷該熒光染料辨別弱陽性表達(dá)的能力。因此，對于特定的單克隆抗體，由于使用了不同的熒光素標(biāo)記，其陰性細(xì)胞核陽性細(xì)胞的S/N比值（信噪比）可以相差4-6倍。一般來講，熒光信號由強(qiáng)到弱的的排序是：PE>APC>PE-Cy5>PERCP-Cy5.5>FITC>PERCP。

2.熒光素標(biāo)記效率：

抗體上標(biāo)記熒光素的數(shù)量（F/P）值也會影響相對熒光強(qiáng)度。每一個抗體上可標(biāo)記幾個FITC或PERCP分子（通常為2-9個），而APC和PE的標(biāo)記量約為每個抗體標(biāo)記一個熒光分子。FITC為小分子化合物，而PE，PERCP和APC則是分子量較大的熒光蛋白。受熒光標(biāo)記物的化學(xué)性質(zhì)要求限制，IGM型抗體通常只用小分子的熒光素進(jìn)行標(biāo)記，如FITC、TEXAS RED、Cy3和Cy5。

3.抗原表達(dá)豐度：

高表達(dá)的抗原幾乎可以用任何熒光素標(biāo)記的抗體檢測，而較低表達(dá)的抗原則需要用較高亮度的熒光素標(biāo)記的抗體進(jìn)行檢測，從而達(dá)到有效區(qū)分陽性細(xì)胞群和陰性細(xì)胞的目的。

4.細(xì)胞自發(fā)熒光：

每個細(xì)胞群體都帶有不同水平的自發(fā)熒光，由于細(xì)胞的自發(fā)熒光在高波長范圍里（>600nm）迅速降低，所以在檢測自發(fā)熒光水平高的細(xì)胞時，使用發(fā)射波長較長的熒光染料（比如APC）可以得到較好的檢測結(jié)果。

5.非特異性結(jié)合

有些熒光標(biāo)記的抗體會表現(xiàn)出低水平的非特異性結(jié)合，就會造成陰性細(xì)胞的熒光水平升高。

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