Cas9核酸酶（CRISPR相關(guān)蛋白9）是一種RNA引導(dǎo)的核酸內(nèi)切酶，用于通過產(chǎn)生序列特異性雙鏈斷裂（DSB）進(jìn)行基因組編輯。DNA中DSB的存在導(dǎo)致細(xì)胞修復(fù)過程的激活，其中DNA恢復(fù)通過非同源末端連接（NHEJ）或同源定向重組（HDR）發(fā)生，從而改變基因組?；蚯玫?、缺失或插入說明了CRISPR/Cas9系統(tǒng)的主要成就。

艾美捷OZ Biosciences 優(yōu)化的Cas9核酸酶化膿性鏈球菌設(shè)計(jì)用于活細(xì)胞或生物體的基因組編輯以及體外消化。

使用 Cas9/RNP 遞送提高基因組編輯效率 成功的 CRISPR/Cas9 基因組編輯可以通過多種方法（質(zhì)粒、mRNA、核酸酶、病毒遞送）進(jìn)行。

為什么選擇Cas9蛋白而不是Cas9 DNA或mRNA？

Cas 9重組蛋白比核酸遞送速度更快，一旦進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)就完-全活躍，沒有潛伏期（與核酸所需的轉(zhuǎn)錄和翻譯機(jī)器相反）。

這些特性使核酸酶蛋白遞送特別適用于精密基因組工程。

圖1：用sgRNA編程的Cas9核酸酶。結(jié)合后，短向?qū)NA（sgRNA）特異性靶向短DNA序列標(biāo)簽（PAM）。Cas9核酸酶在PAM序列上游切割DNA三個(gè)核苷酸。

高效的核酸遞送是基因組編輯實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵步驟。 為了獲得優(yōu)化的Cas9核酸酶遞送，建議親交付 CRISPR轉(zhuǎn)染試劑。

規(guī)格：

CAS9050： 50 μg Cas9 核酸酶在 50 μL 中

CAS9100： 100 μg Cas9 核酸酶在 100 μL 中

CAS9500： 500 μg （5x100 μg） Cas9 核酸酶，500μL （5x100 μL）

提供的試劑：Cas9反應(yīng)緩沖液（10X）

推薦用于 CRISPR Cas9 基因組編輯實(shí)驗(yàn)。

優(yōu)化的Cas9核酸酶化膿性鏈球菌設(shè)計(jì)用于活細(xì)胞或生物體的基因組編輯以及體外消化。

使用Pro-DeliverIN CRISPR在細(xì)胞中進(jìn)行基因組編輯

Cas9核酸酶可以直接遞送到培養(yǎng)物或生物體中的活細(xì)胞中，使用ProDeliverIN CRISPR（# PIC60100 或 #PIC60500）。以下方案是在24孔板中進(jìn)行基因組編輯的示例：

制備 1 μg Cas9 核酸酶和 250 ng sgRNA 的混合物上下移液輕輕混合

在室溫（推薦 10°C）下孵育 25 分鐘以形成 Cas9/RNP 復(fù)合物直接加入 2 μL ProDeliverIN CRISPR

在室溫（推薦 20°C）下孵育 25 分鐘以形成復(fù)合物用完整的培養(yǎng)基補(bǔ)充 50 μL

將復(fù)合物滴加到細(xì)胞上，并在標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)條件下孵育。