NGS Normalizer Kit（NGB-61900）：去除引物二聚體；同時清理和規(guī)范PCR產(chǎn)品；使用離心法快速（不到20分鐘）、高通量且易于處理；足夠的洗脫體積（100µL）用于重復(fù)或未來的測定；非磁珠凈化。

艾美捷NGS Normalizer Kit允許高通量NGS文庫PCR擴(kuò)增子NGS文庫PCR產(chǎn)物濃度的凈化和標(biāo)準(zhǔn)化（~5±1 ng/µL）。清理去除了所有PCR副產(chǎn)物，包括引物、二聚體、酶和未合并的核苷酸。純化基于96孔柱色譜法，使用Norgen的專有樹脂作為分離基質(zhì)。金額每個96孔中的Norgen矩陣被優(yōu)化為具有有限的結(jié)合能力，因此每個孔可以洗脫相等濃度的PCR產(chǎn)物。

該過程包括首先添加3卷將緩沖液SK加入到PCR產(chǎn)物中，然后將混合物裝載到96孔標(biāo)準(zhǔn)化上盤子然后用所提供的洗滌溶液A洗滌結(jié)合的PCR擴(kuò)增子，以便除去任何殘留的雜質(zhì)，并用洗脫緩沖液B洗脫純化的PCR擴(kuò)增子。純化和標(biāo)準(zhǔn)化的文庫PCR擴(kuò)增子可以用于NGS工作流程和其他測序應(yīng)用。

NGS Normalizer Kit使用前注意事項(xiàng)：

•應(yīng)使用變速離心機(jī)以獲得最大的套件性能。如果變量高速離心機(jī)是不可用的，可以使用固定速度的離心機(jī)，但減少可以觀察到產(chǎn)率。

•通過添加90 mL 96-100%乙醇制備工作濃度的洗滌溶液a（由用戶提供）至供應(yīng)的含有濃縮洗滌溶液的瓶子

A.這將提供128毫升的最終體積。瓶子上的標(biāo)簽有一個盒子，可以檢查以表明已添加乙醇。

1.將3體積的緩沖液SK直接添加到包含文庫PCR延伸的每個孔中產(chǎn)品（例如：將60µL緩沖液SK添加到20µL文庫PCR產(chǎn)物中）?；旌戏绞缴舷挛苹蛴媚z帶渦旋密封板并短暫離心盤子。

2.將96孔歸一化板放置在所提供的96孔收集板的頂部。

3.將混合物加入96孔正火板的孔中。

4.以最大速度或3200 x g（約4000 RPM）離心組件2分鐘。

5.丟棄流通。重新組裝96井正火板和96井收集板。

注：確保每個孔中的所有裂解物都已進(jìn)入底部盤子如果整個裂解液體積未通過，則再離心2分鐘。

6.將400µL洗滌溶液A涂抹在96孔正火板的每個孔上。以最大速度或3200 x g（約4000 RPM）離心組件2分鐘。

注：確保每個孔中的所有裂解物都已進(jìn)入底部盤子如果整個裂解液體積未通過，則再離心2分鐘。

7.丟棄流通。重新組裝96井正火板和96井收集板。

8.重復(fù)步驟6和7，再次清洗盤子。

9.以最大速度或3200 x g（約4000 RPM）離心組件15分鐘以使板完丨全干燥。

10.在紙巾上輕輕拍打96孔正火板的底部。

11.堆疊96孔正火板和96孔洗脫板（提供）。

12.向96孔板的每個孔中加入100µL洗脫緩沖液B。

13.以200 x g（~1000 RPM）離心組件1分鐘，然后離心3200 x g（約4000轉(zhuǎn)/分）持續(xù)4分鐘。

DNA的儲存：

使用提供的膠帶密封洗脫板。純化的DNA樣品可以在–20°C下儲存幾天。建議將樣品放置在–70°C的溫度下用于長期儲存