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初級(jí)會(huì)員 | 第5年

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內(nèi)切酶EcoRI, 無動(dòng)物源性使用方法

時(shí)間:2023/9/4閱讀:151
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內(nèi)切酶EcoRI, 無動(dòng)物源性背景:

經(jīng)過基因工程改造的EcoRI,ADCF,能夠在5~15分鐘內(nèi)消化DNA。它可用于鑒定質(zhì)粒DNA、PCR產(chǎn)物和基因組。EcoRI,ADCF具有以下特點(diǎn):在515分鐘內(nèi)快速消化,極-好的酶活性冗余,易于處理底物過量或具有挑戰(zhàn)性的模板消化。這種酶不含動(dòng)物來源的成分

 

艾美捷內(nèi)切酶EcoRI, 無動(dòng)物源性

Cat #: C-BSM2504S

Size: 5000 U

Storage: -20°C

 

內(nèi)切酶EcoRI, 無動(dòng)物源性組成:


 

單位定義

一個(gè)單位定義為在37°C、50µL推薦反應(yīng)緩沖液中1小時(shí)內(nèi)消化1µgλDNA所需的EcoRI

 

熱滅活

80°C下培養(yǎng)20分鐘。

質(zhì)量控制

凈化

SDS-PAGE檢測(cè)結(jié)果大于95%

核酸內(nèi)切酶殘基

20UEcoRI與超螺旋質(zhì)粒DNA37°C下孵育4小時(shí),DNA電泳中未檢測(cè)到質(zhì)粒的變化。

藍(lán)/白篩選試驗(yàn)

1μl EcoRI消化含有locZa基因的合適載體。將消化產(chǎn)物連接并轉(zhuǎn)化到大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞中。在含有X-Gal、IPTG和適當(dāng)抗生素的Luria Bertani培養(yǎng)板上,成功門控的β-半乳糖苷酶基因可以表達(dá)并產(chǎn)生藍(lán)色菌落,而中斷的基因(即降解的DNA末端)產(chǎn)生白色菌落。ADCF限制性內(nèi)切酶必須產(chǎn)生少于1%的白色菌落。

DNA酶殘基

20UEcoRI與雙鏈DNA37°C下孵育16h,DNA電泳未檢測(cè)到DNA的變化。

RNase殘基

20UEcoRIRNA37℃下孵育1小時(shí),電泳中未檢測(cè)到RNA降解

結(jié)扎和清算

在最佳反應(yīng)溫度下用20UEcoRI消化后,DNA片段可以在22°C下與T4 DNA連接酶(Fast)連接。在這些連接的片段中,通過瓊脂糖凝膠電泳測(cè)定,大多數(shù)片段可以用EcoRl重新切割。

 

宿主DNA殘基

通過對(duì)大腸桿菌16S rDNA特異性的TaqMan-qPCR檢測(cè)酶溶液中的核酸殘基,檢測(cè)到少于10pg的大腸桿菌基因組殘基。

 

宿主蛋白殘留:

通過ELISA測(cè)定大腸桿菌宿主蛋白低于50ppm。

 

無菌

未檢測(cè)到大腸桿菌。

內(nèi)毒素殘留量

<10 EU/mg


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