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在狹義上,結(jié)締組織是指它所包含的三種纖維:膠原纖維、網(wǎng)狀纖維和彈性纖維,其中膠原纖維分布極為廣、含量極為豐富。Masson三色染色被稱為Masson染色法,是結(jié)締組織染色特別經(jīng)-典的方法之一,也是膠原纖維染色的經(jīng)典技術(shù)。術(shù)語“三色染色"通常是指對細(xì)胞進(jìn)行染色細(xì)胞核,并選擇性地顯示膠原纖維和肌肉纖維。這種方法的染色原理與陰離子染料分子的大小和組織滲透性:較小的分子可以很容易地滲透致密和低滲透性組織,而較大的分子只能進(jìn)入結(jié)構(gòu)松散和高滲透性組織。然而,苯胺藍(lán)分子量大,因此Masson染色后,肌肉纖維呈現(xiàn)紅色,膠原蛋白纖維呈現(xiàn)綠色(淺綠色)或藍(lán)色(苯胺藍(lán))。
艾美捷改良Masson三色染色液基本參數(shù):
目錄號:A-CSH274
規(guī)格:8×50mL
儲存:在2~8°C的黑暗中儲存(12個月)
程序:
1.將組織固定在10%福爾馬林固定劑中,然后常規(guī)脫水和包埋。切片被切割成4μm的厚度,然后進(jìn)行常規(guī)的脫蠟直至脫水。
2.將切片置于Bouin溶液中,在室溫下孵育過夜或置于37°C的培養(yǎng)箱中孵育2小時進(jìn)行媒介化。然后,用自來水沖洗切片,直到切片上的黃色消失。
3.切片用天青石藍(lán)染色溶液染色2-3分鐘,然后進(jìn)行短暫的水洗。
4.切片用Mayer蘇木精染色溶液染色2-3分鐘,然后進(jìn)行短暫的水洗。
5.切片在酸-醇分化溶液中分化幾秒鐘,然后用水沖洗10分鐘
6.切片用胭脂紅染色液染色10分鐘,然后用蒸餾水漂洗。
7.將切片用磷鉬酸水合物溶液處理約10分鐘。
8.倒出上清液,在不用水沖洗的情況下,將切片直接用苯胺藍(lán)染色溶液染色5分鐘。
9.將切片用弱酸溶液處理2分鐘。
10.使用95%乙醇進(jìn)行快速脫水。切片在100%乙醇中脫水三次,每次5-10秒。
11.切片在二甲苯中清洗三次,每次清洗1-2分鐘。最后,使用中性安裝介質(zhì)進(jìn)行密封
改良Masson三色染色液供應(yīng)材料和儲存條件:
注:
1.應(yīng)盡可能徹-底地對各部分進(jìn)行除石蠟處理。酸性醇的分化時間應(yīng)根據(jù)切片的厚度、組織類型及其年齡來確定。
2.磷鉬酸的作用有兩個:一方面,它將染紅的膠原纖維區(qū)分為無色或淡紅色,同時使肌肉纖維和纖維素仍呈現(xiàn)鮮紅色;另一方面,它作為膠原纖維的媒染劑,促進(jìn)它們與苯胺藍(lán)染色溶液的結(jié)合。
3.苯胺藍(lán)染色后用弱酸溶液處理,目的是去除細(xì)胞質(zhì)中的藍(lán)色,使染色生動清晰。對于用Zenker溶液固定的組織,弱酸溶液的處理時間可以延長到5分鐘。
4.弱酸性溶液可提高色彩的清晰度和生動性。如果需要大量,可以制備0.1-0.3%的乙酸溶液作為替代品。
該試劑僅用于科學(xué)研究領(lǐng)域,不適用于臨床診斷或其他用途。
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