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糖皮質(zhì)激素信號(hào)通路在發(fā)育、體液穩(wěn)態(tài)、認(rèn)知、免疫反應(yīng)和代謝中發(fā)揮著重要作用。糖皮質(zhì)激素是一類(lèi)類(lèi)固醇激素,可與糖皮質(zhì)激素受體結(jié)合,導(dǎo)致其易位至細(xì)胞核。易位后,受體可以調(diào)節(jié)大量基因的轉(zhuǎn)錄,包括調(diào)節(jié)葡萄糖代謝和炎癥反應(yīng)的基因。
糖皮質(zhì)激素受體通路報(bào)告試劑盒旨在監(jiān)測(cè)培養(yǎng)細(xì)胞中糖皮質(zhì)激素信號(hào)通路的活性。該試劑盒包含糖皮質(zhì)激素受體配體結(jié)合域的轉(zhuǎn)染就緒表達(dá)載體,該載體與 GAL4 的 DNA 結(jié)合域 (DBD) 融合 (GAL4 DBD-GR)。該融合構(gòu)建體在多聚化 GAL4 上游激活序列 (UAS) 的控制下激活螢火蟲(chóng)熒光素酶表達(dá)。這允許特異性檢測(cè)糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)的糖皮質(zhì)激素受體激活,而不需要單獨(dú)的轉(zhuǎn)錄靶標(biāo),并且與其他核受體途徑的交叉反應(yīng)性較低。GAL4/UAS 報(bào)告基因與組成型表達(dá)海腎(海三色堇)熒光素酶載體預(yù)混合,
該試劑盒還包括與組成型表達(dá)海腎熒光素酶載體預(yù)混合的非誘導(dǎo)型螢火蟲(chóng)熒光素酶載體作為陰性對(duì)照。非誘導(dǎo)型熒光素酶載體包含受最小啟動(dòng)子控制的螢火蟲(chóng)熒光素酶基因,但沒(méi)有任何額外的響應(yīng)元件。陰性對(duì)照對(duì)于確定途徑特異性效應(yīng)和背景熒光素酶活性至關(guān)重要。
艾美捷GAL4報(bào)告基因試劑盒(糖皮質(zhì)激素受體途徑):
貨號(hào):60522
英文名稱(chēng):GAL4 Reporter Kit (Glucocorticoid Receptor Pathway)
規(guī)格:500 rxns.
同義詞:糖皮質(zhì)激素受體、GR、核受體亞家族 3 C 組成員 1、NR3C1、GAL4、GAL4/UAS、半乳糖凝集素、基于細(xì)胞的檢測(cè)試劑盒、基于細(xì)胞的檢測(cè)、報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒
需要但未提供的材料:
• 哺乳動(dòng)物細(xì)胞系和適當(dāng)?shù)募?xì)胞培養(yǎng)基
• 96 孔組織培養(yǎng)板或經(jīng)過(guò) 96 孔組織培養(yǎng)處理的白色透明底檢測(cè) 板(Corning # 3610)
• 用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞系的轉(zhuǎn)染試劑
• Opti-MEM I 低血清培養(yǎng)基(Life Technologies #31985-062)
• 兩步熒光素酶測(cè)定系統(tǒng):
兩步熒光素酶(螢火蟲(chóng)和海腎)測(cè)定 (BPS Bioscience #60683):該系統(tǒng)直接在生長(zhǎng)培養(yǎng)基中測(cè)定細(xì)胞。它可以與任何光度計(jì)一起使用。
不需要自動(dòng) 注射器。
• 光度計(jì)
GAL4報(bào)告基因試劑盒(糖皮質(zhì)激素受體途徑)組分:
GAL4報(bào)告基因試劑盒(糖皮質(zhì)激素受體途徑)文獻(xiàn)參考:
Paguio A, et al. (2010) Improved Dual-Luciferase Reporter Assays for Nuclear Receptors. Curr Chem Genomics. 4: 43-49.
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