凝血酶原（FII）是一種依賴維生素K的單鏈糖蛋白，分子量為72 kDa，當(dāng)存在FXa、FVa、鈣離子和磷脂的情況下，由FXa激活為凝血酶（FIIa）。

凝血酶原(FII)活性檢測的顯色試劑盒用于定量測定血漿和含有凝血酶原（FII）的濃縮物中凝血酶原（FII）的功能活性。該方法適用于檸檬酸鹽或EDTA采集的血漿。

艾美捷Rossix凝血酶原(FII)活性檢測的顯色試劑盒（Ros-200040）測量原理：

FII的功能活性通過一種顯色凝血酶原酶方法進(jìn)行測定，其中人源FII在牛FV、鈣離子和磷脂的存在下，由人源FXa激活為凝血酶（FIIa）。通過對顯色凝血酶原酶底物的水解來確定形成的FIIa的量。樣品的FII活性與血漿或FII濃縮物標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行比較，F(xiàn)II的效力以國際單位（IU）表示。凝血酶原酶復(fù)合物對γ-羧化敏感，因此與蛇毒基于凝血酶原的方法不同，該方法不會激活α-羧基化的FII。

凝血酶原(FII)活性檢測的顯色試劑盒成分：

活化劑試劑，3.0 mL（4支）- REF 2010

活化劑試劑含有凍干的人源FXa、牛FVa、CaCl2和磷脂。每支試劑足夠進(jìn)行25次測試。

FIIa底物，6 mL（1支）- REF 2080

顯色凝血酶（FIIa）底物（H-D-Phe-Pip-Arg- pNA）的液體溶液，濃度為2.0 mmol/L。

FII稀釋緩沖液，儲備溶液，20 mL（1支）- REF 2050

稀釋緩沖液的液體儲備溶液。

準(zhǔn)備工作：

活化劑試劑

用3.0 mL水重溶。在20-25°C下靜置5分鐘，并進(jìn)行間歇性輕輕混勻，完-全重溶。

FIIa底物，6 mL

可直接使用。

FII稀釋緩沖液，儲備溶液，20 mL

用水稀釋1 + 9，得到0.05 mol/L Tris-HCl緩沖工作溶液，pH值為7.3（20°C），含有1%牛血清白蛋白。

注意：所有重溶和稀釋應(yīng)使用至少符合NCCLS II型水3或歐洲藥典注射用水的質(zhì)量的水進(jìn)行。

存儲和穩(wěn)定性：

密封的試劑在2-8°C下穩(wěn)定，直到標(biāo)簽上的失效日期。注意避免試劑受微生物污染。

- 重溶后的活化劑試劑：

重溶后在2-8°C下穩(wěn)定8小時，在20-25°C下穩(wěn)定2小時，在37°C下穩(wěn)定2小時。

- 顯色凝血酶（FIIa）底物：

打開的瓶子在2-8°C下穩(wěn)定1個月。

- FII稀釋緩沖液儲備溶液：

打開的瓶子在2-8°C下穩(wěn)定1個月。

緩沖工作溶液應(yīng)在制備當(dāng)天使用。

所需但未提供的材料：

- 去離子水，NCCLS II型水或歐洲藥典注射用水或更高質(zhì)量的水。

- 人血漿或FII濃縮物，效力與世界衛(wèi)生組織（WHO）FII活性國際標(biāo)準(zhǔn)相比。

- 檸檬酸，2%（用于終點法）

- 校準(zhǔn)的移液管

- 光度計，405 nm（終點法還需490 nm）

- 37°C恒溫培養(yǎng)箱

- 塑料試管和渦旋混勻器

- 計時器

注意：

制備活化劑試劑時使用的每個供體單位均經(jīng)過FDA批準(zhǔn)的方法進(jìn)行了乙型肝炎表面抗原和HIV 1和2以及丙型肝炎抗體的檢測，結(jié)果為陰性。然而，由于沒有任何測試可以完-全排除這些血液傳播疾病的存在，因此在處理和處置這種人源試劑時應(yīng)謹(jǐn)慎。

- 避免與皮膚和眼睛接觸。

- 不要排入下水道。

- 穿適當(dāng)?shù)姆雷o(hù)服。

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