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Digoxigenin-11-dUTP,通過PCR,Nick Translation等應(yīng)用整合到DNA / cDNA中,用于DNA / cDNA探針的制備,測序等方面。
Digoxigenin-11-dUTP可通過以下方法整合到DNA/cDNA中:
1.用Taq聚合酶進行PCR
2.用DNAse I / DNA聚合酶I進行Nick Translation
3.用Klenow exo-進行引物延伸
4.用末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶(TdT)標記寡核苷酸3'末端
5.用MMLV逆轉(zhuǎn)錄酶進行逆轉(zhuǎn)錄
Digoxigenin-11-dUTP可通過以下方法整合到RNA中:
用末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶(TdT)標記3'末端
推薦的用于PCR和Nick Translation的Digoxigenin-11-dUTP / dTTP比例:35% 高辛-11-dUTP / 65%dTTP
請注意:Digoxigenin-11-dUTP的終濃度取決于應(yīng)用和實驗條件。為獲得良好的產(chǎn)品收率和高摻入率,建議單獨優(yōu)化Digoxigenin-11-dUTP / dTTP比率
艾美捷Digoxigenin-11-dUTP,高辛/二硝基苯酚(NU-803-DIGXS):
運輸:通過凝膠包進行運輸。
存儲條件:應(yīng)在-20°C的環(huán)境下保存。
短期(累計最多1周)暴露于室溫下是可行的。
保質(zhì)期:12個月。
分子式:C43H65N4O21P3(自由酸形式)。
分子量:1066.91克/摩爾(自由酸形式)。
精確質(zhì)量:1066.34克/摩爾(自由酸形式)。
純度:高于或等于95%(通過高效液相色譜法測定)。
形態(tài):在10 mM Tris-HCl溶液中的過濾溶液,分子量截留30 kDa。
顏色:無色至淡黃色。
濃度:1.0 mM至1.1 mM。
pH值:7.5,誤差范圍±0.5。
光譜特性:zui大吸收波長λmax為290納米,摩爾吸光系數(shù)ε為8.8 L·摩爾^-1·厘米^-1(Tris-HCl,pH 7.5)。
應(yīng)用:
生物素-11-dUTP可以通過以下方法嵌入到DNA或cDNA中:
使用Taq聚合酶進行聚合酶鏈式反應(yīng)(PCR)。
利用DNA酶I/DNA聚合酶I進行缺口翻譯(Nick Translation)。
使用Klenow exo-進行引物延伸(Primer Extension)。
使用末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶(Terminal deoxynucleotidyl Transferase,簡稱TdT)進行3'端標記。
使用MMLV逆轉(zhuǎn)錄酶進行逆轉(zhuǎn)錄。
此外,生物素-11-dUTP還可以通過以下方法嵌入到RNA中:
使用末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶(TdT)進行3'-端標記。
Digoxigenin-11-dUTP相關(guān)產(chǎn)品:
HighFidelity Digoxigenin PCR Labeling Kit, #APP-101-DIGX
Digoxigenin NT Labeling Kit, #PP-310-DIGX
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