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abm的脂質體轉染試劑是一種特別的聚陽離子和脂質體配方,保證在包括原代細胞在內的多種細胞類型中具有高轉染效率。
艾美捷脂質體轉染試劑(ABS-G2500):
單位:1.0 毫升
存儲條件:存儲于4oC。請勿冷凍。
特點:
Z小毒性
在一系列細胞中表現(xiàn)Z越
應用:
將DNA轉染到培養(yǎng)的貼壁真核細胞中。
脂質體轉染試劑使用方法:
請使用以下條件作為指導,以在6孔板或35毫米培養(yǎng)皿中轉染哺乳動物細胞。
1. 在轉染前18至24小時,以70%的密度播種細胞。對于懸浮細胞,以5 x 10^5 細胞/毫升的密度播種。
2. 對于每個轉染樣本,請按以下方式準備復合物:
溶液A:將2.0微克的DNA稀釋到100微升無血清、無抗生素的培養(yǎng)基中。
溶液B:在使用前通過彈動試管混合DNAfectin™ Plus,然后將6-10微升的DNAfectin™ Plus稀釋到100微升無血清、無抗生素的培養(yǎng)基中。
在室溫下孵育溶液A和溶液B 5分鐘。
3. 合并溶液,輕輕混合以確保均勻分布,并在室溫下孵育20分鐘。
注意:復合物在室溫下穩(wěn)定3-5小時。
4. 向每個DNA-轉染復合物中加入0.8毫升無血清培養(yǎng)基,并通過劇烈彈動試管充分混合。
5. 抽吸每個孔中的所有培養(yǎng)基,然后將1.0毫升的轉染試劑復合物直接加入到每個孔中(對于貼壁細胞)。對于懸浮細胞,收集細胞并以300xg離心以收集細胞沉淀,用1.0毫升轉染復合物重懸。然后將細胞和轉染復合物轉移到6孔板中。孵育細胞。
6. 在5-8小時后,移除轉染溶液,加入2.0毫升完整培養(yǎng)基(含血清和抗生素)。繼續(xù)孵育細胞。
7. 在48-72小時后,可以使用適當?shù)臋z測方法分析轉基因的表達,或繼續(xù)進行穩(wěn)定細胞系的生成。
8. 制造穩(wěn)定細胞系:在存在選擇標記的情況下,以與殺傷曲線確定中使用的密度相同的密度進行細胞傳代。
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