CellSafe-BioMycoX支原體PCR檢測(cè)試劑盒利用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR），這是一種檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)物和其他細(xì)胞培養(yǎng)物中支原體污染的Z高靈敏度選擇衍生生物制品。該引物組特異于支原體基因組。這允許檢測(cè)口腔分枝桿菌、豬鼻分枝桿菌、精氨酸分枝桿菌、發(fā)酵分枝桿菌、瘦骨精漿體萊德拉維，人型分枝桿菌，通常在細(xì)胞培養(yǎng)中作為污染物出現(xiàn)。此外，該試劑盒可以檢測(cè)M。肺炎支原體、唾液支原體、滑膜支原體和解脲原體種。真核生物和細(xì)菌DNA未擴(kuò)增BioMycoX支原體PCR檢測(cè)試劑盒。

艾美捷CellSafe-BioMycoX支原體PCR檢測(cè)試劑盒（#D-25, D-50, D-100）特點(diǎn)：

篩選研發(fā)細(xì)胞培養(yǎng)中的支原體污染

高靈敏度檢測(cè)209種支原體

模板DNA：培養(yǎng)上清液煮沸或從培養(yǎng)細(xì)胞中提取基因組DNA

高靈敏度：10~100拷貝/反應(yīng)

特異性：不檢測(cè)與支原體有密切親緣關(guān)系的其他細(xì)菌種類

UDG系統(tǒng)：防止交叉污染

CellSafe-BioMycoX支原體PCR檢測(cè)試劑盒靈敏度：

使用此試劑盒進(jìn)行PCR的靈敏度為每個(gè)反應(yīng)10到100份目標(biāo)DNA拷貝。在實(shí)際培養(yǎng)樣本中檢測(cè)的靈敏度取決于樣本制備的質(zhì)量。

預(yù)防交叉污染：

采取措施以Z小化從一個(gè)實(shí)驗(yàn)到下一個(gè)實(shí)驗(yàn)核酸的潛在交叉污染。使用不同的工作區(qū)和移液管進(jìn)行模板制備和PCR設(shè)置步驟。

2X PCR主混合液中包含dUTP而非dTTP。當(dāng)dUTP在PCR擴(kuò)增中取代dTTP時(shí)，UNG處理（尿嘧啶-N-糖基化酶，HiSenseTM UDG熱敏感，產(chǎn)品編號(hào).SCU-100，不在本試劑盒中提供）可以防止含有dU的PCR產(chǎn)物的后續(xù)再擴(kuò)增。UNG通過水解dU含有的DNA位點(diǎn)上的尿嘧啶-糖苷鍵，作用于單鏈和雙鏈dU含有的DNA。通過這種策略，交叉污染被消除，而模板DNA（含有T的DNA）保持完整。

預(yù)防交叉污染的注意事項(xiàng)：

在處理試劑盒中包含的陽性對(duì)照DNA時(shí)可能會(huì)發(fā)生交叉污染。為了防止交叉污染，在PCR過程中處理陽性對(duì)照時(shí)使用不同的地點(diǎn)和移液管。確保使用試劑盒中包含的PCR級(jí)水，并在實(shí)驗(yàn)期間佩戴手套。此外，使用過濾吸頭以防止氣溶膠。

CellSafe-BioMycoX支原體PCR檢測(cè)試劑盒凝膠電泳結(jié)果：

使用定量的M. arginini（精氨酸菌）基因組DNA進(jìn)行測(cè)試

1. 100bp ladder

2. 104 copies

3. 103 copies

4. 102 copies

5. 101 copies

6. 1 copy

7. 陽性對(duì)照

8. 無模板對(duì)照

當(dāng)存在支原體污染時(shí)，會(huì)出現(xiàn)大約250-300堿基對(duì)大小的條帶。大約700堿基對(duì)的內(nèi)部控制DNA條帶表明PCR反應(yīng)正常進(jìn)行。

1) 建議通過添加1μl陽性對(duì)照DNA進(jìn)行無模板對(duì)照反應(yīng)和陽性對(duì)照反應(yīng)。

2) 如果PCR反應(yīng)受到高濃度的胎牛血清（FBS）抑制，使用基因組DNA作為模板可能會(huì)有幫助。

3) PCR抑制物質(zhì)可能會(huì)在細(xì)胞培養(yǎng)基中積累（例如，雜交瘤細(xì)胞等）。在這種情況下，使用稀釋后的樣本或基因組DNA作為模板可能會(huì)有幫助。

4) 在嚴(yán)重的支原體污染情況下，內(nèi)部控制DNA條帶可能不會(huì)出現(xiàn)。

CellSafe致力于提供支原體全面解決方案，可以有效檢測(cè)、消除和預(yù)防影響細(xì)胞培養(yǎng)的支原體。作為CellSafe在中國(guó)區(qū)域的代理，艾美捷科技有限公司將為中國(guó)客戶提供全面的CellSafe產(chǎn)品。