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補(bǔ)體TCC是一種酶免疫測定法,用于半定量測定可溶性人EDTA血漿中的末端補(bǔ)體復(fù)合物(sTCC,也稱為TCC或sC5b-9)。該產(chǎn)品僅供專業(yè)人士使用。結(jié)果不得用于臨床診斷或患者管理,僅供研究使用。
艾美捷Svar Life Science-Complement TCC:
產(chǎn)品代碼 COMPL TCC RUO
檢測目標(biāo) TCC
規(guī)格 96孔
技術(shù) ELISA
結(jié)果讀取 半定量
范圍 0-400納克/毫升
檢測時(shí)間 2小時(shí)
檢測系統(tǒng) 辣根過氧化物酶/TMB在450納米處讀取
監(jiān)管狀態(tài) 僅供研究使用
Svar Life ScienceiLite-Complement TCC內(nèi)容:
一個(gè)帶有微孔板孔(12x8)的框架,孔內(nèi)涂有抗TCC單克隆抗體,密封在帶有干燥劑的鋁箔包裝中。
1.5毫升低濃度對照(LC)??芍苯邮褂谩?/span>
1.5毫升高濃度對照(HC)??芍苯邮褂谩?/span>
2瓶30毫升稀釋液(Dil)??芍苯邮褂?。
15毫升含有辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的抗TCC抗體的結(jié)合物??芍苯邮褂?。
15毫升底物TMB??芍苯邮褂?。
15毫升終止液(0.5M硫酸)??芍苯邮褂?。
30毫升洗滌液,30倍濃縮。
6瓶1.5毫升的校準(zhǔn)液,含有人類純化的TCC,濃度分別為0納克/毫升、10納克/毫升、50納克/毫升、100納克/毫升、200納克/毫升和400納克/毫升。可直接使用。
Svar Life ScienceiLite-Complement TCC檢測原理:
該檢測是一種比色夾心酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)。樣本在測定稀釋液中稀釋,并將100微升稀釋后的樣本轉(zhuǎn)移到微孔板孔中,在室溫下孵育60分鐘。在第一次孵育期間,樣本中的TCC被預(yù)先涂覆在微孔板表面的抗TCC單克隆抗體捕獲。經(jīng)過洗滌去除未結(jié)合的物質(zhì)后,添加第二種辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的單克隆抗體以檢測與孔結(jié)合的TCC。再孵育30分鐘后,孔再次被洗滌,并添加底物并進(jìn)行孵育。顏色發(fā)展在30分鐘后停止,顏色在分光光度計(jì)中被測量。顏色與與孔結(jié)合的TCC量直接成比例。通過與校準(zhǔn)樣本的顏色發(fā)展進(jìn)行比較,確定TCC的量。
結(jié)果計(jì)算
從450納米波長中減去參考波長,并計(jì)算所有樣本的平均光密度(OD)值。通過將校準(zhǔn)液的OD值與濃度作圖,構(gòu)建校準(zhǔn)曲線。六個(gè)校準(zhǔn)液的值分別為0納克/毫升、10納克/毫升、50納克/毫升、100納克/毫升、200納克/毫升和400納克/毫升。根據(jù)校準(zhǔn)曲線讀取未知樣本的濃度。
注意:本使用說明書中的所有性能數(shù)據(jù)都是使用四參數(shù)曲線擬合計(jì)算的。用戶可以選擇不同的曲線擬合。建議每個(gè)實(shí)驗(yàn)室使用選定的曲線擬合建立參考范圍。
注意:計(jì)算樣本中TCC的濃度時(shí),必須根據(jù)上面的協(xié)議進(jìn)行稀釋補(bǔ)償,即10倍稀釋。如果樣本結(jié)果超出校準(zhǔn)曲線的范圍,建議進(jìn)行更高倍數(shù)的稀釋,并在計(jì)算樣本中的濃度時(shí)考慮這一點(diǎn)。
校準(zhǔn)器曲線示例:
請注意:上圖顯示了半定量標(biāo)準(zhǔn)曲線的示例,不應(yīng)用于實(shí)際樣品解釋
文獻(xiàn)參考:
Bergseth et al. Molecular Immunology 56 (2013) 232–239. An international serum standard for
application in assays to detect human complement activation products
Deppisch et al, Kidney Int. 1990 Feb;37(2):696-706. Fluid phase generation of terminal
complement complex as a novel index of bioincompatibility
Harboe et al, Adv Drug Deliv Rev. 2011 Sep 16;63(12):976-87. Advances in assay of
complement function and activation.
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