cAMP是一種普遍存在于所有哺乳動物細胞中的第二信使。這種信使調節(jié)各種激素、神經遞質、生長因子、細胞因子和其他配體受體的信號轉導。cAMP磷酸二酯酶是水解和截斷源自受體激活的cAMP信號傳導的唯1途徑。cAMP水解活性由一個相當大的多酶家族提供,該家族具有D特的細胞內定位和調節(jié)特性。在各種PDE家族(PDE1-PDE11)中,PDE4有4個基因(PDE4A、PDE4B、PDE4C、PDE4D)以多剪接變體形式表達。
PDE4活性測量需要兩步反應,在第一步反應中,cAMP被PDE活性水解成非環(huán)狀。通過使PDE源變性或加入PDE4選擇性抑制劑來停止該反應,然后通過第二步酶反應將AMP轉化為腺苷達到平衡。由于腺苷是中性的,因此通過離子交換色譜法用電荷分離cAMP或AMP。為了避免其他PDE的背景貢獻,該PDE測定在針對PDE4優(yōu)化的底物濃度下進行。PDE4酶活性與第一反應中形成的腺苷成正比。
PDE4活性測量在2-3小時內提供可重復的結果。該試劑盒提供足夠的試劑,與內部控制一起處理50或100個樣本。試劑盒試劑在推薦條件下儲存可穩(wěn)定6個月。該試劑盒的內容物必須按照瓶子標簽和規(guī)格表上的指示在不同溫度下儲存。
艾美捷FabGennix-PDEase套件(PDEase-100)組成成分:
孵育緩沖液試劑A:5毫升
孵育緩沖液試劑B:5毫升
孵育緩沖液試劑C:5毫升
PDE底物緩沖液D:10毫升
PDE底物:2倍200微升
抑制劑緩沖液:50毫升
第二酶源(10倍濃縮液): 2倍250微升
樹脂懸浮液(10倍濃縮液):100毫升
PDE4酶對照:1倍200微升
文獻參考:
Joshi, Rashika, et al. "Phosphodiesterase (PDE) inhibitor torbafylline (HWA 448) attenuates burn-induced rat skeletal muscle proteolysis through the PDE4/cAMP/EPAC/PI3K/Akt pathway." Molecular and cellular endocrinology 393.1 (2014): 152-163. PMID24973766
Al-Tawashi, Azza, and Chris Gehring. “Phosphodiesterase Activity Is Regulated by CC2D1A That Is Implicated in Non-Syndromic Intellectual Disability." Cell Communication and Signaling?: CCS 11 (2013): 47. PMC3704924
Gobejishvili, Leila et al. “Rolipram Attenuates Bile Duct Ligation–Induced Liver Injury in Rats: A Potential Pathogenic Role of PDE4." The Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics 347.1 (2013): 80–90. PMC. PMC3781411
Gobejishvili, Leila et al. “S-Adenosylmethionine Decreases Lipopolysaccharide-Induced Phosphodiesterase 4B2 and Attenuates Tumor Necrosis Factor Expression via cAMP/Protein Kinase A Pathway." The Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics 337.2 (2011): 433–443. PMC3083110
Li, Yuting et al. “Regulation of Amygdalar PKA by β-Arrestin-2/phosphodiesterase-4 Complex Is Critical for Fear Conditioning."Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America 106.51 (2009): 21918–21923. PMC2799795
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