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當(dāng)前位置:武漢艾美捷科技有限公司>>生化試劑>> 艾美捷生化試劑PsbA丨D1 protein of PSII
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所 在 地武漢市
更新時(shí)間:2021-08-31 16:42:23瀏覽次數(shù):156次
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由于PsbA(D1)蛋白質(zhì)的生物學(xué)特性,在樣品中可以觀察到許多降解產(chǎn)物,并且在使用抗PsbA抗體時(shí)可以觀察到這些降解產(chǎn)物,包括表觀分子量為24kDa和16kDa的產(chǎn)物。D1降解是一組復(fù)雜的事件,觀察到的產(chǎn)物可能受到提取程序和收獲前細(xì)胞生理學(xué)的影響。D1和細(xì)胞色素b559之間可能發(fā)生交聯(lián),使蛋白質(zhì)在凝膠中的位置升高。在藍(lán)藻(PCC7942)中,通過將抗體與PsbA游離肽預(yù)孵育,三條不同的條帶競(jìng)爭(zhēng),表明所有條帶確實(shí)是PsbA及其前體或分解產(chǎn)物。還對(duì)菠菜和衣藻進(jìn)行了競(jìng)爭(zhēng)分析,確認(rèn)了PsbA條帶的身份。
抗PsbA抗體不會(huì)檢測(cè)D2蛋白,因?yàn)橛糜诋a(chǎn)生PsbA抗體的肽與D2序列沒有同源性。艾美捷 PsbA|D1 protein of PSII應(yīng)用實(shí)例:
不同數(shù)量的PsbA蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品(AS01 016S)250 fmol(1)、125 fmol(2)、62.5 fmol(3)、31.25 fmol(4)、15.625 fmol(5)和2µg總蛋白,從使用蛋白質(zhì)提取緩沖液PEB(AS08 300)提取的Med4(6,7)中提取。樣品用1X樣品緩沖液(NuPAGE LDS樣品緩沖液(Invitrogen))稀釋,補(bǔ)充50 mM DTT,在70°C下加熱5分鐘,并在裝載前保持在冰上。蛋白質(zhì)樣品在4-12%的Bolt Plus凝膠、LDS-PAGE上分離,并使用罐轉(zhuǎn)移法在PVDF上吸附70分鐘。在室溫下攪拌2%封閉劑或5%非脂肪乳(溶解于20 mM Tris、137 mM氯化鈉pH 7.6和0.1%(v/v)吐溫-20(TBS-T)中)1小時(shí)后,立即封閉印跡。在室溫下攪拌,以1:10000的稀釋度(在封閉試劑中)在一級(jí)抗體中培養(yǎng)印跡1h。傾析抗體溶液,短暫沖洗印跡兩次,然后在室溫下攪拌,用TBS-T清洗1x15分鐘和3x5分鐘。將印跡在二級(jí)抗體(山羊抗兔IgG-辣根過氧化物酶結(jié)合物,推薦二級(jí)抗體AS09 602,Agrisera)中培養(yǎng),在室溫下攪拌,在封閉試劑中稀釋至1:25 000,持續(xù)1h。按上述方法清洗污漬。根據(jù)制造商的說明,使用化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑開發(fā)印跡。使用CCD成像儀(VersaDoc MP 4000)和Quantity One軟件(Bio-Rad)獲得斑點(diǎn)圖像。曝光時(shí)間為30秒。
Agrisera公司提供的植物領(lǐng)域的抗體涵蓋擬南芥、萊茵衣藻、藍(lán)藻、松柏類、硅藻、大豆、大麥、蒺藜苜蓿等等。艾美捷科技是Agrisera的中國(guó)代理商,為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的PsbA|D1 protein of PSII。
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