脂質(zhì)包被珠被設(shè)計用于蛋白質(zhì)下拉實驗。用于檢測純化蛋白質(zhì)、細(xì)胞裂解物中蛋白質(zhì)的脂質(zhì)結(jié)合，或放射性標(biāo)記的體外翻譯產(chǎn)物的結(jié)合。

PI（4,5）P2珠由瓊脂糖組成，每毫升珠含有10納摩爾的結(jié)合PI（4,5-）P2，足以進(jìn)行幾次蛋白質(zhì)結(jié)合實驗。每1mL珠粒包括少量對照珠粒。更多數(shù)量的控制珠也可供購買。

作為Biogradetech-d家代理，艾美捷科技強烈推薦Biogradetech熱銷產(chǎn)品 PI(4,5)P2 瓊脂糖珠。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

脂質(zhì)珠 - 蛋白質(zhì)協(xié)議：

我們提供以下協(xié)議作為指南，并強烈鼓勵研究人員查閱科學(xué)文獻(xiàn)并進(jìn)行優(yōu)化實驗，以確立對其感興趣的蛋白質(zhì)z有利的條件。

充分混合珠（不要使用渦旋）。將50 – 100 微升的50%珠懸液轉(zhuǎn)移到0.5 – 1.5 毫升的管中。

以1000 x g或更低的速度離心珠。小心移除上清液，避免丟失珠。

用10倍過量的洗滌緩沖液洗滌珠。輕輕混合，孵育1-2分鐘。重復(fù)洗滌步驟兩次。

小心移除洗滌上清液，并將珠在含有您的蛋白質(zhì)的結(jié)合緩沖液中重新懸浮。 a. 對于純化的蛋白質(zhì)，使用1-10 微克的蛋白質(zhì)，用足夠的結(jié)合緩沖液稀釋形成50%脂質(zhì)珠懸液。 b. 對于細(xì)胞裂解物、提取物、亞細(xì)胞組分：使用大約1 毫克的總蛋白質(zhì)對1 毫升結(jié)合緩沖液。將整個1毫升的制備樣品加入到您洗滌過的珠中。

孵育蛋白質(zhì)-珠溶液1-3小時。孵育可以在室溫或4°C下進(jìn)行，取決于您蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性。需要連續(xù)運動以保持珠懸浮。

離心珠并小心移除上清液。如果需要，上清液可以用來監(jiān)測未結(jié)合的蛋白質(zhì)。

用10倍過量的洗滌緩沖液洗滌珠。輕輕混合，孵育1-2分鐘。重復(fù)洗滌步驟五次。如果您選擇在結(jié)合緩沖液中使用牛血清白蛋白（BSA），請確保在進(jìn)行下一步之前將其c底洗出。

在最后一次洗滌后，通過向珠中加入等體積的2X Laemmli樣品緩沖液（或類似物）并加熱至70°C 10分鐘來洗脫結(jié)合的蛋白質(zhì)。

加熱后，離心珠并移除上清液。將上清液儲存在4°C下，直到分析。丟棄珠。

蛋白質(zhì)可以通過SDS-PAGE分離，并通過凝膠的Coomassie藍(lán)染色、蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移和免疫印跡來檢測感興趣的蛋白質(zhì)，或進(jìn)行自顯影。

文獻(xiàn)參考：

1) Gupta, S., J. C. Fanzo, et al. (2003). “T cell receptor engagement leads to the recruitment of IBP, a novel guanine nucleotide exchange factor, to the immunological synapse." J Biol Chem 278(44): 43541-9.

2) Kawahara, T. and J. D. Lambeth (2008). “Phosphatidylinositol (4,5)-bisphosphate modulates Nox5 localization via an N-terminal polybasic region." Mol Biol Cell 19(10): 4020-31.

3) Kim, S. K., H. Kim, et al. (2011). “Phosphatidylinositol phosphates directly bind to neurofilament light chain (NF-L) for the regulation of NF-L self assembly." Exp Mol Med 43(3): 153-60.

4) Lewis, A. E., et al. (2011). “Identification of nuclear phosphatidylinositol 4,5-bisphosphate-interacting proteins by neomycin extraction." Mol Cell Proteomics 10(2): M110 003376.

5) Ulicna, L., et al. (2018). “PIP2 epigenetically represses rRNA genes transcription interacting with PHF8." Biochimica et Biophysica Acta (BBA) – Molecular and Cell Biology of Lipids 1863(3): 266-275.

6) Huang, D., et al. (2019). “Hypoxia induces actin cytoskeleton remodeling by regulating the binding of CAPZA1 to F-actin via PIP2 to drive EMT in hepatocellular carcinoma." Cancer Letters 448(28): 117-127.

Biogradetech成立于2015年，總部位于美國加利福尼亞州，早期以產(chǎn)品技術(shù)研發(fā)服務(wù)起家，逐步發(fā)展了廣泛的產(chǎn)品線，并將其商業(yè)化銷售，包括蛋白質(zhì)、抗體、酶、培養(yǎng)基、試劑盒和儀器。適用于細(xì)胞生物學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)、微生物學(xué)、診斷學(xué)、生物化學(xué)、神經(jīng)科學(xué)、血液分析和高通量藥物篩選等領(lǐng)域。

PI(4 5)P2 瓊脂糖珠(蛋白標(biāo)準(zhǔn)品)PI(4 5)P2 瓊脂糖珠(蛋白標(biāo)準(zhǔn)品)