酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）原理：

該檢測基于夾心ELISA技術(shù)，其中一種針對組裝好的AAV衣殼上的構(gòu)象表位的單克隆抗體（mab）被包被在板上，并用于捕獲樣本中的AAV顆粒。

捕獲的AAV顆粒的檢測是一個(gè)兩步過程。

生物s偶聯(lián)的mab與捕獲的AAV顆粒結(jié)合。

鏈霉親和素過氧化物酶結(jié)合物與生物s分子反應(yīng)。加入底物后會(huì)產(chǎn)生顏色反應(yīng)，該反應(yīng)與特異性結(jié)合的病毒顆粒的數(shù)量成正比。

AAV定量方法比較：

每種常用的定量方法都有其優(yōu)缺點(diǎn)：

定量PCR（qPCR）廣泛使用，但存在樣本制備、引物設(shè)計(jì)或PCR效率等問題，可能導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)室間結(jié)果的高變異性。

數(shù)字滴液PCR方法克服了qPCR的一些限制。然而，由于不同的樣本處理協(xié)議，實(shí)驗(yàn)室間的差異仍然可能發(fā)生。

斑點(diǎn)印跡是一種簡單且定量的方法，如果使用可靠的參考材料。然而，它受到一般西方印跡法線性和動(dòng)態(tài)范圍有限的影響。

鑒于上述技術(shù)的實(shí)用缺陷，傳統(tǒng)的夾心ELISA目前在實(shí)驗(yàn)室間和實(shí)驗(yàn)室內(nèi)變異性以及易用性方面似乎更y越。因此，它代表了可靠和可重復(fù)定量總rAVV衣殼滴度的最佳格式。

使用重組/突變AAV：

重組/突變AAV載體的識(shí)別取決于受重組/突變影響的特定衣殼區(qū)域。PROGEN的AAV ELISA中使用的捕獲抗體結(jié)合特定且在某些情況下定義明確的構(gòu)象表位。這些表位是由相應(yīng)AAV血清型的衣殼組裝產(chǎn)生的。ELISA可能識(shí)別您的重組/突變AAV載體的第一個(gè)跡象是抗體結(jié)合表位的存在。然而，衣殼蛋白的蛋白質(zhì)序列的變化也可能影響蛋白質(zhì)的構(gòu)象，因此影響AAV衣殼上呈現(xiàn)的表位的構(gòu)象。這可能影響抗體的結(jié)合親和力，并影響基于AAV ELISA試劑盒提供的（非重組）試劑盒對照的滴度測定。由于這些特性強(qiáng)烈依賴于特定的重組/突變，PROGEN不能保證成功和精確定量您的重組/突變AAV載體。即使重組/突變AAV衣殼上仍然存在抗體結(jié)合表位，您的檢測也需要針對您的特定AAV載體進(jìn)行測試和優(yōu)化。

PROGEN強(qiáng)烈建議生產(chǎn)和校準(zhǔn)合適的（重組/突變）試劑盒對照，以確保使用PROGEN ELISA試劑盒可靠地確定您個(gè)別重組/突變AAV載體的滴度。

作為PROGEN在中國的區(qū)域總代理，艾美捷科技強(qiáng)烈推薦PROGEN熱銷產(chǎn)品AAV2 滴度檢測試劑盒。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

AAV2 滴度檢測試劑盒：

數(shù)量96次測試

反應(yīng)性 AAV2

儲(chǔ)存 2-8°C

用途 僅供研究使用

應(yīng)用 ELISA

產(chǎn)品描述 d特的微孔板酶免疫測定，用于定量AAV2的病毒粒子和組裝好的空衣殼。捕獲抗體檢測到的構(gòu)象表位不存在于未組裝的衣殼蛋白上。

試劑盒對照/標(biāo)準(zhǔn) AAV2的空衣殼制劑

供應(yīng)形式試劑盒，12 x 8孔條狀包裝

AAV2 滴度檢測試劑盒特點(diǎn)：

AAV2衣殼定量ELISA

完整和空AAV2衣殼的檢測

A20抗體用作捕獲和檢測抗體

文獻(xiàn)參考：

Hamann,M.V.et al.Improved targeting of human CD4+Tcells by nanobody-modified AAV2 gene therapy vectors.PLoS One 16,(2021).

Satkunanathan,S.,Thorpe,R.&Zhao,Y.The function ofDNA binding protein nucleophosmin in AAV replication.Virology 510,46-54(2017).

Lock M,McGorray S,et al.Characterization ofa recombinant Adeno-Associated Virus Type 2 referencestandard material;Hum Gene Therapy 21:1273-1285 (2010).

Lochrie,M.A.et al.Mutations on the External Surfaces ofAdeno-AssociatedVirus Type 2 Capsids That AffectTransduction andNeutralization.J.Virol.80,821-834 (2006).

Kells,A.P.et al.AAV-mediated gene delivery of BDNF orGDNF is neuroprotective in a model of Huntington disease. Mol.Ther.9,682-688(2004).

Grimm,D.et al.Titration of AAV-2 particles via a novelcapsidELISA:packaging of genomes can limit productionof recombinant AAV-2.Gene Ther.6,1322-30(1999).

PROGEN公司成立于1983年，總部位于德國海德堡，由海德堡大學(xué)教授聯(lián)合創(chuàng)辦，體外診斷試劑的制造商和供應(yīng)商，也是德國癌癥研究中心的合作伙伴。 主要產(chǎn)品線： 經(jīng)過質(zhì)檢驗(yàn)證的抗體、體外診斷產(chǎn)品、抗體噬菌體展示技術(shù)、密度梯度分離液和AAV(腺相關(guān)病毒）檢測試劑盒等。

作為PROGEN在中國的經(jīng)銷商，艾美捷科技有限公司將為中國客戶提供全面的PROGEN以及客戶訂制化服務(wù)。歡迎大家隨時(shí)聯(lián)系我們。

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