游離β-人絨毛膜促x腺激素（β-HCG）ELISA是一種酶免疫測(cè)定法，用于定量測(cè)定人血清和EDTA血漿中的游離β-HCG。僅供研究使用。不適用于獨(dú)立程序。

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游離β人絨毛膜促x腺激素(?-HCG) ELISA試劑盒檢測(cè)原理：

游離β-hCG ELISA試劑盒是一種基于夾心原理的固相酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）。微孔板孔中包被了一種針對(duì)游離β-hCG分子上d特抗原位點(diǎn)的單克隆[小鼠]抗體。含有內(nèi)源性游離β-hCG的樣本在包被孔中與酶結(jié)合物孵育，酶結(jié)合物是一種與辣根過氧化物酶結(jié)合的抗β-hCG抗體（兔源）。孵育后，未結(jié)合的結(jié)合物被洗去。結(jié)合的過氧化物酶量與樣本中游離β-hCG的濃度成正比。加入底物溶液后，產(chǎn)生的色度強(qiáng)度與樣本中游離β-hCG的濃度成正比。通過加入終止溶液來停止比色反應(yīng)，測(cè)量產(chǎn)生的黃色產(chǎn)物的光學(xué)密度（OD）。通過繪制標(biāo)準(zhǔn)品的OD值與濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線，使用該標(biāo)準(zhǔn)曲線確定未知樣本的濃度。

儲(chǔ)存條件：

未打開的試劑盒和試劑以及打開的試劑必須儲(chǔ)存在2°C至8°C的溫度下。在2°C-8°C下儲(chǔ)存時(shí)，未開封的試劑將保持反應(yīng)性，直至到期。請(qǐng)勿在此日期之后使用代理。如果按照上述描述儲(chǔ)存，并在試劑盒標(biāo)簽上的有效期內(nèi)，打開的試劑盒可以保留四周的活性。微量滴定板包含可折斷的條帶。未使用的井必須存放在2°C至8°C的密封箔袋中，包括干燥劑，并在提供的板框中使用。一旦箔袋被打開，必須小心再次將其緊緊關(guān)閉。一旦打開，試劑瓶必須再次緊緊關(guān)閉。

檢測(cè)程序：

每次運(yùn)行都必須包含一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1. 在架上固定所需數(shù)量的微孔板孔。

2. 使用新的一次性吸頭，向相應(yīng)的孔中分別加入50 ?L的標(biāo)準(zhǔn)品、對(duì)照品和樣本。

3. 向每個(gè)孔中加入100 ?L的零標(biāo)準(zhǔn)緩沖液。

c底混合30秒。這一步驟的w全混合非常重要。

4. 在37°C下孵育30分鐘。

5. 迅速搖動(dòng)以倒出孔中的內(nèi)容物。

使用1X工作洗滌液（每個(gè)孔400 ?L）沖洗孔5次。在吸水紙上猛擊孔以去除殘留的液滴。

重要提示：洗滌程序的正確執(zhí)行會(huì)顯著影響這個(gè)檢測(cè)的靈敏度和精確度！

6. 向每個(gè)孔中加入150 ?L的酶結(jié)合物。

7. 在37°C下孵育30分鐘。

8. 迅速搖動(dòng)以倒出孔中的內(nèi)容物。

使用1X工作洗滌液（每個(gè)孔400 ?L）沖洗孔5次。在吸水紙上猛擊孔以去除殘留的液滴。

9. 向每個(gè)孔中加入100 ?L的底物溶液。

10. 在室溫下孵育20分鐘。

11. 通過向每個(gè)孔中加入100 ?L的終止溶液來停止酶促反應(yīng)。

重要的是確保所有的藍(lán)色w全變?yōu)辄S色。

12. 使用微孔板讀取器，在450 ±10 nm處測(cè)定每個(gè)孔的吸光度（OD）。

建議在加入終止溶液后15分鐘內(nèi)讀取孔的吸光度。

文獻(xiàn)參考：

1. Engall, E., Methods in Enzymology, volume 70, Van Vunakis, H. and Langone, J.J. (eds.),Academic Press, new York, 419-492 (1980).

2. Uotila M., Rips?ajto, E. and Engvall E., J.Immunol. Metods, 42, 11-15 (2981)

3. Brizot, ML, Jauniaux E. Mckie AT, Farzaneh F and Niclaides KH. Hum. Reprod. 1995; 10;2506-9.

4. Forest JC, Masse J, Rousseau F, Moutquin JM, Brideau NA and Belanger M. Clin.Biochem. 1995; 28:443-9.

ALPCO產(chǎn)品種類多樣，可測(cè)樣品來源包括人、大/小鼠、豚鼠、兔、豬、羊、狗、猴等，涉及神經(jīng)生物學(xué)、骨代謝、心血管疾病和氧化應(yīng)激、細(xì)胞因子與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、糖尿病和肥胖癥、內(nèi)分泌學(xué)、甲狀腺功能、腸胃病學(xué)、免疫學(xué)、生殖激素、抗體和抗原、分子診斷等多個(gè)研究領(lǐng)域，尤以糖尿病和肥胖癥研究領(lǐng)域見長(zhǎng)。

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